5 9 3 минаева любовь валерьевна ^/-/emaci^cl^ эксперртментальная оценка роли изменений системы глутатиона в реализации побочных цитотоксических эффектов повторного введения цржлофо

4.2.1. Влияние средств фармакологической коррекции на активность ферментов, участвующих в восстановлении глутатиона в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при 4.2.1.1. Влияние средств фармакологической коррекции на активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении При повторном введении ЦФ происходит выраженное угнетение глюкозо-6-фосфатдегидрогеназной активности в тканях печени, почек, головно­ го мозга и эритроцитах. В эксперименте на крысах, отравленных ЦФ и полу­ чавших фармакотерапию, было установлено, что использование различных лекарственных препаратов в разной степени влияет на активность фермента в исследуемых тканях (табл. 13), В тканях печени отравленных животных получавших, мексидол, глутоксим и литан, отмечалось достоверное повышение активности Г-6-Ф-ДГ выше показателей группы не леченых крыс, в то время как применение ацетилцистеина и трисана выраженного активирующего действия на активность ключевого фермента пентозофосфатного шунта не оказывало. После введе Влияние фармакологической коррекции на изменение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном введении циклофосфана в дозе 200 мг/кг в течение 10 суток течение 10 суток дозе 20 мг/кг, в ЦФ в суточной * - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой контроля *- достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой отравленных животных без коррекции ния мексидола, глутоксима и литана активность Г-6-Ф-ДГ в тканях этого ор­ гана возрастала в 1,47 (р0,05), в 1,83 (р0,05) и в 1,42 (р0,05) выше зна­ чений не леченого контроля.

Выраженное активирующее действие на фермент используемые пре­ параты оказывали и в тканях почек. Так, максимальное повышение активно­ сти Г-6-Ф-ДГ в тканях почек выше значений не леченой группы на 33,9 % (р0,05) наблюдалось при введении мексидола. Применение ацетшщистеина и литана вызывало достоверный (р0,05) рост активности фермента на 24, % и на 25,9%.

В тканях головного мозга подобный активирующий эффект препара­ тов отмечался в меньшей степени. Только применение глутоксима вызывало повышение активности исследуемого фермента выше значений группы не леченых крыс. По сравнению с показателями этой группы глюкозо-6фосфатдегидрогеназная активность после использования синтетического аналога окисленного глутатиона максимально возрастала в тканях ЦНС на 28,3 % (р0,05).

В эритроцитах, где активность Г-6-Ф-ДГ после повторного введения ЦФ по сравнению с другими тканями снижалась наиболее существенно, применение средств фармакологической коррекции приводило к практиче­ ски полному ее восстановлению. Максимальное активирующее действие на исследуемый фермент оказывали ацетилцистеин, мексидол, глутоксим и литан, применение которых вызывало достоверное ее повышение (р0,05) по сравнению с группой не леченых крыс в 1,59 раза, в 1,95 раза, в 1,80 раза, в 1,86 раза, соответственно. После лечения отравленных животных трисаном и цитофлавином восстановление активности исследуемого фермента было ме­ нее выраженным, но при этом ее значения превысили показатели не леченой группы в 1,44 и 1,48.

Таким образом, введение большинства фармакологических препаратов повышало активность Г-6-Ф-ДГ в тканях и,особенно, в эритроцитах отрав­ ленных животных. Максимальный эффект воздействия отмечался на глюкофосфатдегидрогеназную активность в клетках красной крови. Тенден­ ция к восстановлению активности Г-6-Ф-ДГ в эритроцитах в целом соответ­ ствовала таковой в других исследуемых органах, коэффициент корреляции составил 0,61, что указывает на перспективность использования этого мето­ да при оценке эффективности применяемых фармакологических препаратов на фоне повторного введения ЦФ.

4.2.1.2. Влияние средств фармакологической коррекции на активность глутатионредуктазы в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении циклофосфана Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназная реакция является основным ис­ точником НАДФН, необходимого для осуществления глутатионредуктазной реакции, что позволяет рассматривать эти ферменты в качестве единой сис­ темы, функцией которой является восстановление глутатиона из окисленной формы. Взаимосвязь между этими ферментами, кроме того, осуществляется и благодаря наличию единых механизмов регуляции ферментативной актив­ ности. Проведенное исследование позволило выявить наличие сходства влияния фармакологических средств на глюкозо-6-фосфатдегидрогеназную и глутатионредуктазную активность, что согласуется со сведениями, изло­ женными в работе B.Anderson [80]. Наиболее ярко выраженное взаимное влияние этих ферментов было отмечено в тех тканях, где угнетающее воз­ действие ЦФ на активность ферментов было наиболее выраженным - в тка­ нях печени и эритроцитах (табл. 14).

Применение исследуемых препаратов оказывало выраженное индуци­ рующее воздействие на активность ГР в тканях печени отравленных крыс.

Активность фермента достоверно возрастала после применения трисана - в 1,38 раза (р0,05), цитофлавина - в 1,66 раза, мексидола - в 1,63 раза, глутоксима - в 1,54 раза, литана - в 1,43 раза по сравнению с группой живот­ ных, не подвергавшихся лечению. Введение ацетилцистеина привело к Влияние фармакологической коррекции на изменение активности глутатионредуктазы в тканях различных органов бе­ лых беспородных крыс при повторном введении циклофосфана в дозе 200 мг/кг в течение 10 суток (мкмоль/(мин • г бел­ течение 10 суток ЦФ в суточной дозе 20 мг/кг, в * - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой контроля - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой отравленных животных без коррекции повышению активности исследуемого фермента, значения которого превысили показатели отравленных животных без фармакологической кор­ рекции в 1,8 раза, интактного контроля на 15,1%.

Изменение активности ГР в тканях почек было менее выраженным.

Применение ацетилцистеина и мексидола сопровождалось ыраженным ин­ дуцирующим эффектом, при этом активность фермента возрастала (р0,05) по сравнению с показателями группы без коррекционной терапии в 1,55 и 1,34 раза, введение глутоксима и литана увеличивало (р0,05) данный пока­ затель на 25,2 % и 21,6%.

Используемые фармакологические препараты практически не влияли на активность ГР в тканях головного мозга, лишь лечение синтетическими аналогами окисленного глутатиона увеличивало активность ГР в 1,69 и 1, раза по сравнению с не лечеными животными.

В эритроцитах, где на фоне интоксикации ЦФ отмечалось существен­ ное снижение активности ГР, введение любого из препаратов приводило к увеличению активности фермента. Наиболее ярко оно проявилось при при­ менении ацетилцистеина, мексидола, глутоксима и литана, которые вызыва­ ли достоверный (р0,05) рост глутатионредуктазной активности выше зна­ чений контроля без фармакологической коррекции - в 1,50, в 1,47, в 1,54, в 1,47 раза, соответственно.

Таким образом, использование фармакологических препаратов в усло­ виях повторного введения ЦФ оказывало стимулирующее влияние на актив­ ность ГР во всех исследуемых тканях, в том числе и эритроцитах.

Таким образом, применение средств фармакологической коррекции оказывало сходное влияние на активность ГР и Г-6-Ф-ДГ в эритроцитах и тканях печени.

4.2.2. Влияние средств фармакологической коррекции на активность ферментов антиоксидантной защиты в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении 4.2.2.1. Влияние средств фармакологической коррекции на активность глутатионпероксидазы в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении Индуцирующее воздействие фармакологических препаратов на ак­ тивность ферментов, принимающих участие в восстановлении глутатиона из окисленной формы: глутатионредуктазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и связанное с этим повышение уровня ВГ в клетке, не могли не отразиться на активности глутатионпероксидазы, утилизирующей его при осуществле­ нии реакций антиперекисной защиты. На фоне применения препаратов фар­ макологической коррекции в условиях повторного введения ЦФ отмечалось повышение активности ГП (табл. 15).

По сравнению с показателями не леченых животных введение фарма­ кологических препаратов сопровождалось достоверным увеличением актив­ ности ГП в тканях печени, почек и головного мозга. При этом активность фермента в тканях печени, почек, головного мозга отравленных крыс, полу­ чавших лекарственных средства, либо не отличалась от интактного контро­ ля, либо даже превосходила таковой. В эритроцитах отравленных крыс при­ менение всех используемых фармакологических препаратов приводило к снижению активности фермента до значений контроля.

Наиболее ярко индуцирующее воздействие фармакологических пре­ паратов на активность ГП проявилось в тканях печени, где она превысила (р0,05) значения не леченого контроля после введения мексидола в 1, раза, глутоксима - в 1,83 раза, литана - в 1,38 раза.

Влияние фармакологической коррекции на изменение активности глутатионпероксидазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном введении циклофосфана в дозе 200 мг/кг в течение 10 суток (мкмоль/(мин • г течение 10 суток ЦФ в суточной дозе 20 мг/кг, в * - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой контроля - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой отравленных животных без коррекции После терапии ацетилцистеином, глутоксимом, литаном в тканях по­ чек активность ГП возрастала (р0,05) на 25,6 %, на 18,4 %, на 17,2 % выше показателей животных, не подвергавшихся коррекции.

Существенное индуцирующее воздействие оказали препараты и на ак­ тивность ГП в тканях головного мозга. После их введения активность фер­ мента достоверно (р0,05) возрастала на 34,4 % (ацетилцистеин), 21,9 % (трисан), 28,1 % (цитофлавин), 43,8 % (глутоксим) выше значений контроля без лечения.

В эритроцитах отравленных животных фармакологическая коррекция различными препаратами сопровождалась снижением уровня исследуемого фермента до значений интактной группы.

4.2.2.2. Влияние средств фармакологической коррекции на активность глутатион-8-трансферазы в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении Глутатион-8-трансфераза является ферментом, принимающим актив­ ное участие как в процессах конъюгации циклофосфана, так и в осуществле­ нии Se-независимой глутатионпероксидазной функции. Благодаря этому ГТ занимает одно из ключевых мест в механизмах детоксикации ряда алкилирующих агентов.

Изучение активности этого фермента в тканях отравленных животных на фоне применения фармакологических средств позволило выявить у них наличие выраженного индуцирующего воздействия на ГТ в ткани печени (табл. 16). У отравленных животных, получавших средства коррекции, глутатионтрансферазная активность в тканях печени достоверно превышала соответствующие показатели контрольных особей.

В тканях печени после применения мексидола активность ГТ макси­ мально возрастала (р0,05) на 26,0 % выше значений контроля, после ис Влияние фармакологической коррекции на изменение активности глутатион-8-трансферазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном введении циклофосфана в дозе 200 мг/кг в течение 10 суток (мкмоль/(мин • г течение 10 суток ЦФ в суточной дозе 20 мг/кг, в * - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой контроля - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой отравленных животных без коррекции пользования глутоксима - на 25,2 %, а литана - на 55,8 % выше показателей животных, не подвергавшихся коррекции.

Применение фармакологических препаратов не приводило к достовер­ ному изменению активности исследуемого фермента в тканях почек по сравнению с группой животных без лечения.