5 9 3 минаева любовь валерьевна ^/-/emaci^cl^ эксперртментальная оценка роли изменений системы глутатиона в реализации побочных цитотоксических эффектов повторного введения цржлофо
4.2.1. Влияние средств фармакологической коррекции на активность ферментов, участвующих в восстановлении глутатиона в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при 4.2.1.1. Влияние средств фармакологической коррекции на активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении При повторном введении ЦФ происходит выраженное угнетение глюкозо-6-фосфатдегидрогеназной активности в тканях печени, почек, головно го мозга и эритроцитах. В эксперименте на крысах, отравленных ЦФ и полу чавших фармакотерапию, было установлено, что использование различных лекарственных препаратов в разной степени влияет на активность фермента в исследуемых тканях (табл. 13), В тканях печени отравленных животных получавших, мексидол, глутоксим и литан, отмечалось достоверное повышение активности Г-6-Ф-ДГ выше показателей группы не леченых крыс, в то время как применение ацетилцистеина и трисана выраженного активирующего действия на активность ключевого фермента пентозофосфатного шунта не оказывало. После введе Влияние фармакологической коррекции на изменение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном введении циклофосфана в дозе 200 мг/кг в течение 10 суток течение 10 суток дозе 20 мг/кг, в ЦФ в суточной * - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой контроля *- достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой отравленных животных без коррекции ния мексидола, глутоксима и литана активность Г-6-Ф-ДГ в тканях этого ор гана возрастала в 1,47 (р0,05), в 1,83 (р0,05) и в 1,42 (р0,05) выше зна чений не леченого контроля.
Выраженное активирующее действие на фермент используемые пре параты оказывали и в тканях почек. Так, максимальное повышение активно сти Г-6-Ф-ДГ в тканях почек выше значений не леченой группы на 33,9 % (р0,05) наблюдалось при введении мексидола. Применение ацетшщистеина и литана вызывало достоверный (р0,05) рост активности фермента на 24, % и на 25,9%.
В тканях головного мозга подобный активирующий эффект препара тов отмечался в меньшей степени. Только применение глутоксима вызывало повышение активности исследуемого фермента выше значений группы не леченых крыс. По сравнению с показателями этой группы глюкозо-6фосфатдегидрогеназная активность после использования синтетического аналога окисленного глутатиона максимально возрастала в тканях ЦНС на 28,3 % (р0,05).
В эритроцитах, где активность Г-6-Ф-ДГ после повторного введения ЦФ по сравнению с другими тканями снижалась наиболее существенно, применение средств фармакологической коррекции приводило к практиче ски полному ее восстановлению. Максимальное активирующее действие на исследуемый фермент оказывали ацетилцистеин, мексидол, глутоксим и литан, применение которых вызывало достоверное ее повышение (р0,05) по сравнению с группой не леченых крыс в 1,59 раза, в 1,95 раза, в 1,80 раза, в 1,86 раза, соответственно. После лечения отравленных животных трисаном и цитофлавином восстановление активности исследуемого фермента было ме нее выраженным, но при этом ее значения превысили показатели не леченой группы в 1,44 и 1,48.
Таким образом, введение большинства фармакологических препаратов повышало активность Г-6-Ф-ДГ в тканях и,особенно, в эритроцитах отрав ленных животных. Максимальный эффект воздействия отмечался на глюкофосфатдегидрогеназную активность в клетках красной крови. Тенден ция к восстановлению активности Г-6-Ф-ДГ в эритроцитах в целом соответ ствовала таковой в других исследуемых органах, коэффициент корреляции составил 0,61, что указывает на перспективность использования этого мето да при оценке эффективности применяемых фармакологических препаратов на фоне повторного введения ЦФ.
4.2.1.2. Влияние средств фармакологической коррекции на активность глутатионредуктазы в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении циклофосфана Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназная реакция является основным ис точником НАДФН, необходимого для осуществления глутатионредуктазной реакции, что позволяет рассматривать эти ферменты в качестве единой сис темы, функцией которой является восстановление глутатиона из окисленной формы. Взаимосвязь между этими ферментами, кроме того, осуществляется и благодаря наличию единых механизмов регуляции ферментативной актив ности. Проведенное исследование позволило выявить наличие сходства влияния фармакологических средств на глюкозо-6-фосфатдегидрогеназную и глутатионредуктазную активность, что согласуется со сведениями, изло женными в работе B.Anderson [80]. Наиболее ярко выраженное взаимное влияние этих ферментов было отмечено в тех тканях, где угнетающее воз действие ЦФ на активность ферментов было наиболее выраженным - в тка нях печени и эритроцитах (табл. 14).
Применение исследуемых препаратов оказывало выраженное индуци рующее воздействие на активность ГР в тканях печени отравленных крыс.
Активность фермента достоверно возрастала после применения трисана - в 1,38 раза (р0,05), цитофлавина - в 1,66 раза, мексидола - в 1,63 раза, глутоксима - в 1,54 раза, литана - в 1,43 раза по сравнению с группой живот ных, не подвергавшихся лечению. Введение ацетилцистеина привело к Влияние фармакологической коррекции на изменение активности глутатионредуктазы в тканях различных органов бе лых беспородных крыс при повторном введении циклофосфана в дозе 200 мг/кг в течение 10 суток (мкмоль/(мин • г бел течение 10 суток ЦФ в суточной дозе 20 мг/кг, в * - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой контроля - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой отравленных животных без коррекции повышению активности исследуемого фермента, значения которого превысили показатели отравленных животных без фармакологической кор рекции в 1,8 раза, интактного контроля на 15,1%.
Изменение активности ГР в тканях почек было менее выраженным.
Применение ацетилцистеина и мексидола сопровождалось ыраженным ин дуцирующим эффектом, при этом активность фермента возрастала (р0,05) по сравнению с показателями группы без коррекционной терапии в 1,55 и 1,34 раза, введение глутоксима и литана увеличивало (р0,05) данный пока затель на 25,2 % и 21,6%.
Используемые фармакологические препараты практически не влияли на активность ГР в тканях головного мозга, лишь лечение синтетическими аналогами окисленного глутатиона увеличивало активность ГР в 1,69 и 1, раза по сравнению с не лечеными животными.
В эритроцитах, где на фоне интоксикации ЦФ отмечалось существен ное снижение активности ГР, введение любого из препаратов приводило к увеличению активности фермента. Наиболее ярко оно проявилось при при менении ацетилцистеина, мексидола, глутоксима и литана, которые вызыва ли достоверный (р0,05) рост глутатионредуктазной активности выше зна чений контроля без фармакологической коррекции - в 1,50, в 1,47, в 1,54, в 1,47 раза, соответственно.
Таким образом, использование фармакологических препаратов в усло виях повторного введения ЦФ оказывало стимулирующее влияние на актив ность ГР во всех исследуемых тканях, в том числе и эритроцитах.
Таким образом, применение средств фармакологической коррекции оказывало сходное влияние на активность ГР и Г-6-Ф-ДГ в эритроцитах и тканях печени.
4.2.2. Влияние средств фармакологической коррекции на активность ферментов антиоксидантной защиты в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении 4.2.2.1. Влияние средств фармакологической коррекции на активность глутатионпероксидазы в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении Индуцирующее воздействие фармакологических препаратов на ак тивность ферментов, принимающих участие в восстановлении глутатиона из окисленной формы: глутатионредуктазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и связанное с этим повышение уровня ВГ в клетке, не могли не отразиться на активности глутатионпероксидазы, утилизирующей его при осуществле нии реакций антиперекисной защиты. На фоне применения препаратов фар макологической коррекции в условиях повторного введения ЦФ отмечалось повышение активности ГП (табл. 15).
По сравнению с показателями не леченых животных введение фарма кологических препаратов сопровождалось достоверным увеличением актив ности ГП в тканях печени, почек и головного мозга. При этом активность фермента в тканях печени, почек, головного мозга отравленных крыс, полу чавших лекарственных средства, либо не отличалась от интактного контро ля, либо даже превосходила таковой. В эритроцитах отравленных крыс при менение всех используемых фармакологических препаратов приводило к снижению активности фермента до значений контроля.
Наиболее ярко индуцирующее воздействие фармакологических пре паратов на активность ГП проявилось в тканях печени, где она превысила (р0,05) значения не леченого контроля после введения мексидола в 1, раза, глутоксима - в 1,83 раза, литана - в 1,38 раза.
Влияние фармакологической коррекции на изменение активности глутатионпероксидазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном введении циклофосфана в дозе 200 мг/кг в течение 10 суток (мкмоль/(мин • г течение 10 суток ЦФ в суточной дозе 20 мг/кг, в * - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой контроля - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой отравленных животных без коррекции После терапии ацетилцистеином, глутоксимом, литаном в тканях по чек активность ГП возрастала (р0,05) на 25,6 %, на 18,4 %, на 17,2 % выше показателей животных, не подвергавшихся коррекции.
Существенное индуцирующее воздействие оказали препараты и на ак тивность ГП в тканях головного мозга. После их введения активность фер мента достоверно (р0,05) возрастала на 34,4 % (ацетилцистеин), 21,9 % (трисан), 28,1 % (цитофлавин), 43,8 % (глутоксим) выше значений контроля без лечения.
В эритроцитах отравленных животных фармакологическая коррекция различными препаратами сопровождалась снижением уровня исследуемого фермента до значений интактной группы.
4.2.2.2. Влияние средств фармакологической коррекции на активность глутатион-8-трансферазы в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах экспериментальных животных при повторном введении Глутатион-8-трансфераза является ферментом, принимающим актив ное участие как в процессах конъюгации циклофосфана, так и в осуществле нии Se-независимой глутатионпероксидазной функции. Благодаря этому ГТ занимает одно из ключевых мест в механизмах детоксикации ряда алкилирующих агентов.
Изучение активности этого фермента в тканях отравленных животных на фоне применения фармакологических средств позволило выявить у них наличие выраженного индуцирующего воздействия на ГТ в ткани печени (табл. 16). У отравленных животных, получавших средства коррекции, глутатионтрансферазная активность в тканях печени достоверно превышала соответствующие показатели контрольных особей.
В тканях печени после применения мексидола активность ГТ макси мально возрастала (р0,05) на 26,0 % выше значений контроля, после ис Влияние фармакологической коррекции на изменение активности глутатион-8-трансферазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном введении циклофосфана в дозе 200 мг/кг в течение 10 суток (мкмоль/(мин • г течение 10 суток ЦФ в суточной дозе 20 мг/кг, в * - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой контроля - достоверность отличия р0,05 по сравнению с группой отравленных животных без коррекции пользования глутоксима - на 25,2 %, а литана - на 55,8 % выше показателей животных, не подвергавшихся коррекции.
Применение фармакологических препаратов не приводило к достовер ному изменению активности исследуемого фермента в тканях почек по сравнению с группой животных без лечения.