WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     | 1 |   ...   | 16 | 17 || 19 | 20 |   ...   | 22 |

5 9 3 минаева любовь валерьевна ^/-/emaci^cl^ эксперртментальная оценка роли изменений системы глутатиона в реализации побочных цитотоксических эффектов повторного введения цржлофо

-- [ Страница 18 ] --

Важность сохранения в клетке равновесия между белковыми тиолами и дисульфидами связана с непосредственным влиянием на углевод­ ный, липидный и белковый обмены, участием в таких процессах жизнедея­ тельности, как работа мембранных структур, деятельность цитоскелета, кле­ точное деление и других. С учетом того, что практически 50% от общего ко­ личества изученных в настоящее время ферментов, в том числе и большин­ ство ферментов энергетического обмена [64] (например, трансферазы - трансаминаза, дегидрогеназы - гексокиназа, фруктокиназа, пируваткиназа, глюглюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, пируватдегидрогеназа, акетоглутаратдегидрогеназа, сукцинатдегидрогеназа, гидроксибутиратдегидрогеназа), являются тиол-зависимыми энзимами, нарушение тиолового ста­ туса тканей может лежать в основе глубоких нарушений процессов биоэнер­ гетики и быть причиной развития тканевой гипоксии, т.е. составить еще од­ но из звеньев патогенеза тяжелых интоксикаций алкилирующими вещества­ ми.

Нарушение процессов тканевого дыхания при отравлениях ЦФ связы­ вают не только со способностью его активных метаболитов алкилировать ряд ферментов тканевого дыхания, вызывая их выраженное ингибирование, но и с повреждающим воздействием образующихся при метаболизме циклофосфана свободных радикалов на митохондриальную мембрану. Так, в рабо­ те В.Ю.Шанина [75] имеется указание на такие причины нарушения утили­ зации кислорода клетками в процессах биологического окисления, как сни­ жение активности и нарушение синтеза дыхательных ферментов митохонд­ рий, разрушение клеточной и наружной митохондриальнои мембран. Еще одной из возможных причин нарушения тканевого дыхания может служить снижение содержания внутриклеточного НАД, связанное с активацией АДФРТ в результате алкилирования нуклеотидов ДНК и образования «апуриновых» локусов [8]. В конечном итоге, развитие тканевой гипоксии при­ водит к утечке активных форм кислорода с терминального участка дыха­ тельной цепи, формируя, таким образом, один из порочных кругов в патоге­ незе токсического действия циклофосфана.

В ходе проведенного эксперимента установлено, что наиболее выра­ женные сдвиги в системе глутатиона отмечались в ткани печени, где, с од­ ной стороны уровень ВГ в норме значительно превосходит содержание в других органах [43], а с другой стороны, метаболизм глутатиона наиболее интенсивен. Период полуобмена ВГ, по данным В.И.Кулинского и Л.С.Колесниченко [44], составляет: в почках - 30 - 50 мин, в печени - около 3 час, головном мозге и эритроцкггах - около 3 суток. В ряде исследований [20] отмечается, что по интенсивности система цитохром Р-450 - зависимых микросомальных монооксигеназ в печени намного превосходит остальные органы. Гидроксилирование ЦФ системой микросомальных монооксигеназ приводит к образованию более токсичных продуктов, т.е. имеет место про­ цесс метаболической активации ксенобиотика [8,9]. В дальнейшем активные продукты под воздействием ГТ подвергаются конъюгации с восстановлен­ ным глутатионом. По-видимому, максимальное увеличение активности мик­ росомальных ферментов именно в тканях печени служит причиной и макси­ мальной активации свободнорадикальных процессов в тканях этого органа, связанных с утечкой активных форм кислорода с цитохрома Р-450 и сопря­ женных с повреждением органических молекул.

Полученные биохимические данные изменения показателей системы глутатиона и сопряженных систем подтверждаются одновременно прове­ денным морфологическим исследованием тканей печени в различные сроки повторной интоксикации ЦФ, которое выявило сопряжение нарастающих морфологических признаков повторной интоксикации, таких как выражен­ ность жировой дистрофии, гиперхромия ядер, расширение синусоидов с уве­ личением кумулятивного эффекта ксенобиотика (рис.5,6 ).

Периферическая кровь является самым доступным объектом для лабо­ раторных исследований, поэтому определение показателей системы глута­ тиона в эритроцитах может использоваться для диагностической оценки сте­ пени тяжести цитотоксических эффектов при повторном воздействии алкилирующих агентов. На это может указывать наличие корреляционных связей между изменениями показателей данной системы во внутренних органах, в частности, в ткани печени и в эритроцитах.

Предпосылкой для такого предположения являются особенности об­ мена глутатиона в клетках красной крови:

1) наличие межорганного обмена ВГ между тканями печени, почек и эритроцитами, обусловленное ограниченностью тканевых запасов цистеина и возможностью синтеза глутатиона de novo [44];

2) относительно большая мощность системы восстановления глутатиона (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа и глутатионредуктаза) из окислен­ ной формы в эритроцитах [44,64].

В ходе эксперимента было выявлено, что в эритроцитах лабораторных животных достоверного изменения концентрации ВГ не отмечалось, содер­ жание его соответствовало показателям контроля.

Эритроциты не обладают ферментной системой микросомального окисления и поэтому в них отсутствуют процессы биотрансформации ЦФ, с образованием электрофильных субстратов для конъюгации, а значит кон­ центрация ВГ может поддерживаться на уровне физиологической нормы.

Межорганный обмен ВГ при повторном введении ЦФ в малых дозах по всей видимости также существенно не изменяется, активация его ресур­ сов в гепатоцитах на ранних стадиях интоксикации после введения относи­ тельно малых доз не нарушает процессы экспорта этого соединения, в отли­ чие от острого отравления ЦФ в больших дозах. Данное положение под­ тверждается сохранением концентрации ВГ в эритроцитах на уровне интактного контроля.

Характер изменения концентрации сульфгидрильных групп носил дозозависимый характер, о чем свидетельствует выраженное нарастание кон­ центрации СГ после повторного введении ЦФ в дозе 40 мг/кг, которая на сутки эксперимента превысила значения контроля в 1,82 раза (р0,05). Дан­ ные изменения, по-видимому, могут иметь компенсаторный характер.

В ходе исследования в клетках красной крови наблюдалась активация ферментов антиоксидантной защиты.

Так, уровень активности ГТ при повторном введении ЦФ в дозе мг/кг на протяжении всего эксперимента увеличивался и превысил в 1, раза (р0,05) показатели группы контроля. Применение более высокой дозы привело к еще более выраженному росту активности ГТ в первые 3 суток ис­ следования в 1,99 раза (р0,05), с последующим снижением ее до значений интактного контроля на 7 сутки эксперимента.

Сходные изменения наблюдались и при исследовании ГП: нарастание активности фермента, происходившее при введении ЦФ в дозе 20 мг/кг в 1, раза (р0,05) и в течение 3 суток после введения 40 мг/кг (в 1,34 раза) (р0,05) сменялось падением до показателей интактной группы.

Активность каталазы на протяжении всего эксперимента нарастала при использовании различных доз ксенобиотика.

Индукция активности данных энзимов в эритроцитах, по-видимому, связана с увеличением интенсивности процессов пероксидации липидов в этих клетках, о чем свидетельствует дозозависимое накопление как первич­ ных продуктов ПОЛ, так и вторичных. Максимальные концентрации ДК и МДА превысили показатели контроля на 10 сутки интоксикации ЦФ в дозе 20 мг/кг в 1,65, 1,32 раза (р0,05) и в 1,79,1,38 раза (р0,05) при использова­ нии более высокой дозы токсиканта.

Определена умеренная корреляционная связь между изменениями по­ казателей ПОЛ в эритроцитах и ткани печени. Коэффициент корреляции при введении обеих доз составил для ДК - 0,50, 0,59, МДА - 0,56.

от контроля Рис. 15. Изменение концентрации диеновых конъюгатов в ткани пече­ ни и эритроцитах при повторном введении ЦФ в дозе 20 мг/кг ОТ контроля Рис. 16. Изменение концентрации диеновых конъюгатов в ткани пече­ ни и эритроцитах при повторном введении ЦФ в дозе 40 мг/кг от контроля Рис. 17. Изменение концентрации малонового диальдегида в ткани пе­ чени и эритроцитах при повторном введении ЦФ в суточной дозе 20 мг/кг.

Рис. 18. Изменение концентрации малонового диальдегида в ткани пе­ чени и эритроцитах при повторном введении ЦФ в суточной дозе 40 мг/кг.

Выраженные изменения наблюдались и при исследовании ферментов в эритроцитах, участвующих в процессе восстановления глутатиона из окис­ ленной формы. Активность их на протяжении всего эксперимента дозозависимо снижалась.

Падение активности Г-6-Ф-ДГ наблюдалось на протяжении всего экс­ перимента. Динамика изменений активности этого фермента в клетках крас­ ной крови коррелировала с таковыми в ткани печени, была установлена уме­ ренная положительная корреляционная связь, коэффициент корреляции со­ ставил при введении ЦФ в дозе 20 мг/кг - 0,65, при дозе 40 мг/кг - 0,53.

от контроля Рис. 19. Изменение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в тка­ ни печени и эритроцитах при повторном введении ЦФ в суточной дозе мг/кг.

от контроля Рис. 20. Изменение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в ткани печени и эритроцитах при повторном введении ЦФ в суточной дозе 40 мг/кг Снижение активности ГР также носило дозозависимый характер Наиболее выраженное достоверное (р0,05) ее падение наблюдалось на 10 сутки экс­ перимента при введении меньшей дозы ксенобиотика - в 1,77 раза ниже кон­ троля и в 1,79 раза при использовании ЦФ в дозе 40 мг/кг. Между измене­ ниями активности ГР в эритроцитах и тканях печени при использовании до­ зы ЦФ 40 мг/кг определялась умеренная положительная корреляционная Рис. 21. Изменение активности глутатионредуктазы в ткани печени и эритроцитах при повторном введении ЦФ в суточной дозе 40 мг\кг.

Таким образом, определение активности Г-6-Ф-ДГ, ГР, содержания ДК, МДА в качестве маркеров оценки степени тяжести цитотоксического поражения тканей печени при повторном введении ЦФ в малых дозах явля­ ется обоснованным.

В ходе эксперимента проведена и сравнительная оценка между срока­ ми появления и выраженностью изменений маркеров гепато- и нефротоксичности (АЛТ, ACT, общего билирубина, креатинина, мочевины, ЩФ) [158] и показателей системы глутатиона при повторной интоксикации ЦФ в суточной дозе 20 мг/кг в течение 10 суток. Установлено, что изменения та­ ких показателей обмена глутатиона, как активность Г-6-Ф-ДГ, ГР, содержа­ ние ДК, МДА происходили в более ранние сроки ( 3 - 5 сутки) и выявлялись при отсутствии достоверных изменений со стороны большинства общеизве­ стных биохимических показателей, а на 10 сутки эксперимента носили более выраженный характер.

Изменения показателей системы глутатиона в тканях почек были ме­ нее интенсивными по сравнению с таковыми в печени. Почки участвуют в непосредственной экскреции как ЦФ в неизмененном виде (20%), так и его метаболитов. При этом непосредственно повреждающего действия на нефроциты, по ряду экспериментальных данных, не наблюдается [9].

Концентрация ВГ, СГ, активность большинства ферментов - Г-6-ФДГ, ГР, ГП, каталазы практически не отличались от значений интактного контроля. Наблюдалась умеренно выраженное повышение активности ГТ в 1-3 сутки эксперимента, которая в 1,43 и 1,36 раза (р0,05) превысила зна­ чения контроля после введения ЦФ в дозах 20 и 40 мг/кг, соответственно.

Кроме того, было отмечено достоверное (р0,05) усиление интенсив­ ности процессов ПОЛ в тканях почек, выраженность которого соответство­ вала вводимой дозе. Концентрация ДК превысила значения контроля в 1,29 и 1,31 раза (р0,05), а МДА - в 1,31 и 1,63 раза (р0,05), соответственно, при повторном введении ЦФ в различных дозах.

Отсутствие значимых изменений после повторного введения ЦФ в различных дозах отмечалось при проведении морфологического исследова­ ния тканей почек (рис. 8, 9).

По сравнению со всеми исследуемыми тканями, изменения показате­ лей системы глутатиона были минимальными в ткани головного мозга. Это связано с наименьшим участием ткани в обмене глутатиона и отсутствием проницаемости гематоэнцефалического барьера для продуктов метаболизма ЦФ.



Pages:     | 1 |   ...   | 16 | 17 || 19 | 20 |   ...   | 22 |
 


Похожие материалы:

« ЛАРИОНОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ РАЗНООБРАЗИЕ СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ НА ГРАДИЕНТЕ КОНТИНЕНТАЛЬНОСТИ КЛИМАТА В ХАКАСИИ 03.00.05 – БОТАНИКА Научный руководитель Ермаков Николай Борисович д.б.н., с.н.с. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск - 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования Цели и задачи исследования Защищаемые положения Научная новизна Практическая значимость Апробация работы и публикации Благодарности ГЛАВА 1. ...»

«Кочерина Наталья Викторовна АЛГОРИТМЫ ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО УЛУЧШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ Специальность 03.00.15 – Генетика Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН В. А. Драгавцев Санкт–Петербург – 2009 2 Оглавление Глава I. Введение…………………………………………………….……….…4 О реальной природе организации сложных полигенных экономически важных признаков растений…….……………………9 Глава II. Постановка задач ...»

« ГАЛКИНА МАРИЯ АНДРЕЕВНА БИОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНВАЗИОННЫХ ВИДОВ РОДА BIDENS L. В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ 03.02.01 – БОТАНИКА ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК Научный руководитель д.б.н. Виноградова Ю.К. Москва – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение ……………………………………………………………………….4 Глава 1. Объекты и методы ………………………………………………….10 Глава 2. История распространения инвазионных видов рода Bidens L. на территории Европы …………………………………… Глава 3. ...»

« Никитенко Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Борок – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 3 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ГЛАВА 2. ФИЗИКО–ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 17 ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 36 ГЛАВА 4. МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО ...»

« Вознийчук Ольга Петровна ПРОСТРАНСТВЕННАЯ СТРУКТУРА И ОРГАНИЗАЦИЯ НАСЕЛЕНИЯ НАЗЕМНЫХ ПОЗВОНОЧНЫХ ЦЕНТРАЛЬНОГО АЛТАЯ 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Ю.С. Равкин Горно-Алтайск – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………….….….4 ГЛАВА 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ, РАЙОН РАБОТ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ………………………….…………………………….…………….….9 1.1. История изучения фауны Центрального ...»

« ТОКРАНОВ АЛЕКСЕЙ МИХАЙЛОВИЧ ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИИ ДОННЫХ И ПРИДОННЫХ РЫБ РАЗЛИЧНЫХ СЕМЕЙСТВ В ПРИКАМЧАТСКИХ ВОДАХ 03.00.10 – ихтиология Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук Петропавловск-Камчатский – 2009 2 Официальные оппоненты: доктор биологических наук, член-корреспондент РАН Черешнев Игорь Александрович доктор биологических наук Долганов Владимир Николаевич доктор биологических наук, профессор Шунтов Вячеслав Петрович ...»







 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.