5 9 3 минаева любовь валерьевна ^/-/emaci^cl^ эксперртментальная оценка роли изменений системы глутатиона в реализации побочных цитотоксических эффектов повторного введения цржлофо

В условиях нарастающего необратимого расходования В Г на процес­ сы конъюгации, уровень концентрации трипептида сохраняется за счет ком­ пенсаторной активации как процессов непосредственного синтеза ВГ, так и процессов его рециклирования, в то же время увеличение наработки продук­ тов СРО приводит к индукции активности ферментов АОЗ. Данные измене­ ния характеризуют компенсаторный период при повторной интоксикации ЦФ.

Последующая возрастающая прооксидантная нагрузка, нарушение тиол-дисульфидного равновесия приводят к увеличению потребности энерго­ ресурсов, в частности НАДФН, однако интенсивность процессов его вос­ становления недостаточна, в связи с выраженным снижением активности ГФ-ДГ, что при увеличении повторной дозовой нагрузки может привести к глубоким нарушениям функционирования системы глутатиона в процессе срыва компенсаторных ресурсов в период декомпенсации.

Таким образом, нарушения состояния и функций системы глутатиона (связанные с поддержанием тиол-дисульфидного равновесия, участием в ре­ гуляции активности ферментов и белковом синтезе, регуляции состояния мембран) являются одним из основных механизмов патогенеза повторных отравлений ЦФ, так как лежат в основе реализации цитотоксического дейст­ вия ксенобиотиков данной группы. По-видимому, основой реализации этого неспецифического цитотоксического действия ЦФ является снижение ак­ тивности Г-6-Ф-ДГ, поставщика НАДФН, необходимого для рециркуляции глутатиона и лимитирующего его обмен, является основным звеном патоге­ неза при повторной интоксикации ЦФ Выявленные изменения состояния системы глутатиона при повторных интоксикациях веществами алкилирующего действия, вероятно, имеют при­ кладное значение для разработки средств патогенетической терапии данных отравлений. Использование в эксперименте на животных средств фармако­ логической коррекции ( ацетилцистеина, мексидола, глутоксима) не только послужило дополнительным доказательством наличия патогенетической взаимосвязи между нарушениями состояния системы глутатиона и цитотоксическими эффектами действия ЦФ, но позволило определить некоторые направления цитопротекции:

1) замещение антиоксидантной функции системы глутатиона - использо­ вание антиоксидантных препаратов;

2) индукция синтеза ВГ - использование предшественников синтеза глу­ татиона;

3) детоксимодифицирующая - использование препаратов окисленного глутатиона.

В качестве патогенетически обоснованных методов лабораторной ди­ агностики оценки степени тяжести цитотоксического поражения тканей ор­ ганизма, эффективности проводимого лечения при повторном введении ЦФ в малых дозах могут быть использованы следующие показатели, характеризующие состояние системы глутатиона и процессы ПОЛ в эритроцитах па­ циентов:

1) определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы;

2) определение активности глутатионредуктазы;

3) определение концентрации малонового диальдегида;

4) определение концентрации диеновых конъюгатов.

ВЫВОДЫ

1. Повторное введение ЦФ в дозах 20, 40 мг/кг в течение 10 суток в ткани печени и в эритроцитах лабораторных животных в ранние сроки ис­ следования (1-5 суток) вызывает компенсаторные изменения системы глута­ тиона в виде увеличения концентрации ВГ, активации ферментов антиоксидантной защиты (ГП, ГТ), ГР.

2. Дальнейшее увеличение дозовой нагрузки приводит к нарушению функций системы глутатиона в ткани печени и в эритроцитах (снижение концентрации СГ, активности ферментов АОЗ ( ГТ, ГП и каталазы), восста­ новления глутатиона (Г-6-Ф-ДГ и ГР), увеличение содержания продуктов ПОЛ (ДК и МДА)), что совпадает с появлением выраженных морфологиче­ ских признаков токсического повреждения ткани печени.

3. Повторное введение циклофосфана в тканях почек и головного мозга достоверных изменений обмена глутатиона не вызывает.

4. Ведущими показателями нарушений обмена глутатиона при по­ вторном введении циклофосфана в дозах 20, 40 мг/кг является снижение ак­ тивности ферментов восстановления глутатиона: Г-6-Ф-ДГ ( в ткани печени - в 2,4 и 2,6 раза, в эритроцитах - в 3,8 и 5,0 раза), ГР ( в ткани печени - в 1, и 1,8 раза, в эритроцитах - 1,7 и 1,8 раза), нарастание продуктов перекисного окисления липидов: ДК ( в ткани печени - в 2,0 и 2,6 раза, в эритроцитах и 1,8 раза), МДА (в ткани печени - 1,6 и 2,1 раза, в эритроцитах - 1,3 и 1,4 раза) на 7-10 сутки исследования.

5. Применение цитопротекторных препаратов различного механизма действия снижает морфологические проявления и биохимические признаки токсического действия повторного введения ЦФ. Препарат усиливающий синтез эндогенного глутатиона - ацетилцистеин приводит к повышению концентрации ВГ, СГ, активации ГР, снижению концентрации ДК, МДА, препарат окисленного глутатиона - глутоксим к активации Г-6-Ф-ДГ, ГР, ГП, снижению концентрации ДК, МДА, антиоксидант - мексидол к актива­ ции ГР, ГП, снижению концентрации ДК, МДА.

6. Между изменениями показателей системы глутатиона в эритроцитах и ткани печени при повторном введении ЦФ установлена умеренная поло­ жительная корреляционная связь ( Г-6-Ф-ДГ - г = 0,65 (20 мг/кг), 0,53 ( мг/кг) ; ГР - г = 0,46 (40 мг/кг); ДК - г = 0,51 (20 мг/кг), 0,59 (40 мг/кг), МДА - г = 0,56 (20-40 мг/кг)), что экспериментально подтверждает возмож­ ность использования данных показателей для оценки степени тяжести цитотоксического поражения ткани печени при повторном введении ЦФ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЩИ

1. Для оценки степени тяжести цитотоксического поражения парен­ химатозных органов и эффективности фармакологической коррекции этого процесса у лиц, проходящих курс полихимиотерапии, представляется воз­ можным использование определения в эритроцитах таких показателей сис­ темы глутатиона как, активность Г-6-Ф-ДГ, ГР, концентрации ДК, МДА;

2. В схему комплексной терапии веществами алкилирующего действия рекомендуется включить фармакологические препараты, обладающие антиоксидантными и антигипоксантными свойствами (например, мексидол), а также препараты предшественника синтеза глутатиона - ацетилцистеин и препараты окисленного глутатиона - глутоксим.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ажунова Т.А. Фитофармакоррекция лекарственных гепатопатий / Т.А.Ажунова, Э.А. Алексеева, Т.Г. Бидогаева // Практическая фитотера­ пия.- 2004. - №3. - С.17-20.

2. Альберт А. Избирательная токсичность / Пер.с англ. А.Альберт. - М.:

Медицина, 1989. - Т.2. - 432 с.

3. Антонов В.Г. Физиологические и биохимические аспекты действия альфа-фетопротеина на гепатоциты и иммунокомпетентные клетки: Дис....

д-ра мед. наук: 03.00.04, 14.00.16 / В.Г.Антонов; Воен. мед. акад. -СПб., 1997.-230 с.

4. Арчаков А.И. Микросомальное окисление / А.И. Арчаков. - М.: Наука, 1975.-327 с.

5. Арчаков А.И. Окисление чужеродных соединений и проблемы токсико­ логии / А.И.Арчаков, И.И.Карузина // Вести. АМН СССР. - 1988. - №1. С. 14-23.

6. Арчаков А.И. Постгеномные технологии и молекулярная медицина / А.И.Арчаков // Вестн. РАН. - 2004. - Т.74, № 5. - С.423 - 428.

7. Барабой В.А. Перекисное окисление и стресс / В.А.Барабой, И.И.Брехман, В.Г.Голотин - СПб.: Наука, 1992. - 148 с.

8. Белоусова А.К. Молекулярные механизмы действия алкилирующих аген­ тов и антибиотиков / А.К.Белоусова // Химиотерапия злокачественных опухолей. - М: Медицина, 1977. - С.61-117.

9. Блохин Н.Н. Химиотерапия опухолевых заболеваний / Н.Н.Блохин, Н.И.Переводчикова. - М.: Медицина, 1984. - 304 с.

Ю.Блюгер А.Ф. Исследование основных патогенетических линий поражения клеток печени в условиях клинической и экспериментальной патологии и подходы к регуляции и купированию этих процессов / А.Ф.Блюгер, А.Я.Майоре // Успехи гепатологии. - Рига: б.и.,1982. - С. 12-34.

П.Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физиче­ ские свойства липидного слоя биологических мембран / Ю.А. Владими­ ров // Биофизика. - 1987. - Т.32, Вып.5. - С.830-844.

12.Воронина Т.А. Механизм действия и обоснование применения препарата мексидол в неврологии / Т.А.Воронина, Л.Д.Смирнов, И.И.Горяйнова М.: Институт биохим. физики. - 2002. - С. 15.

О.Н.Воскресенский, А.П.Левицкий // Вопр. мед. химии. - 1970. - Т. 16, №6.-0.563-583.

И.Гаврилов В.Б. Измерение диеновых конъюгатов в плазме крови по УФпоглощению гептановых и изопропанольных экстрактов / В.Б.Гаврилов, А.Р.Гаврилова, Н.Ф.Хмара // Лаб. дело. - 1988. - №.2. - С.60-64.

15.Гаджиева С.Ш. Цитодифференцирующие агенты в онкологии / С.Ш.Гаджиева, Е.Р.Полосухина, Т.Г.Николаева, Е.М.Трещалина, А.Ю.Барышников, В.Е.Небольсин, В.Г.Антонов // Вопросы онкологии. Т.52,№3.- С.264-274.

16.Гершанович МЛ. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачест­ венных опухолей / М.Л.Гершанович. - М.: Медицина, 1982. - 223с.

17.Гипоксия: адаптация, патогенез, клиника: рук. для врачей / Под. ред.

Ю.Л.Шевченко. - СПб.: ЭЛБИ, 2000. - 384с.

18.Глушков СИ. Нарушения системы глутатиона и их роль в патогеназе острых интоксикаций ксенобиотиками с различными механизмами токси­ ческого действия: Дис.... д-ра. мед. наук: 14.00.20, 03.00. / С.И.Глушков ; Воен. мед. акад. - СПб., 2006. - 451с.

19.Глушков СИ. Состояние глутатион-зависимой антирадикальной системы и процессов перекисного окисления липидов в различных тканях лабора­ торных животных при острых отравлениях тиопенталом натрия / С.И.Глушков, С.А.Куценко, Г.А.Ливанов // Токсикологический вестник. N.1.-0.11-17.

20.Голиков С.Н. Общие механизмы токсического действия / С.Н.Голиков, И.В.Саноцкий, Л.А.Тиунов. - Л.: Медицина, 1986. - 279 с.

2Г Гусев Е.И. Ишемия головного мозга / Е.И.Гусев, В.И.Скворцова - М.:

Медицина, 200 L - 328 с.

22.Еропкин М.Ю. Культуры клеток как модельная система исследования токсичности и скрининга цитопротекторных препаратов / М.Ю.Еропкин, Е.М.Еропкина- СПб.: МОРС АР АВ, 2003. - 239 с.

23.3ападнюк И.П. Лабораторные животные. Разведение, содержание, ис­ пользование в эксперименте / И.П.Западнюк, В.И.Западнюк, Е.А.Захария, Б.В.Западнюк. - Киев: Вища школа, 1983. - 385 с.

24.3егжда Т.В. Окислительно-восстановительный потенциал системы глутатион-окисленный глутатион / Т.В.Зегжда, В.И.Шишлевская, Г.Д.Зегжда // Электрохимия.- 1981.- № 1 7. - С. 1359-1360.

25.3енков Н.К. Окислительный стресс, диагностика, терапия,профилактика / Н.К.Зенков, Е.Б.Меньщикова, С М. Шегин - Новосибирск: б. и., 1993. с.

26.Зозуля Ю.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга / Ю.А.Зозуля, В.А.Барабой, Д.А.Сутковой. - М.: Знание, 2000. - 344 с.

27.Ивницкий Ю.Ю. Интенсивность клеточного дыхания и радиорезистент­ ность организма: Дис.... д-ра мед. наук: 03.00.01 / Ю.Ю.Ивницкий; Воен.

мед. акад. - СПб., 1994. - 262 с.

28.ИВНИЦКИЙ Ю.Ю. Янтарная кислота в системе средств метаболической коррекции функционального состояния и резистентности организма / Ю.Ю.Ивницкий, А.И.Головко, Г.А.Софронов. - СПб.: Воен. мед. акад., 1998.-82 с.

29. Карпищенко А.И. Система белков теплового шока БТШ70 у крыс при отравлении дихлорэтаном / А.И.Карпищенко, С.А.Куценко, С.И.Глушков // Токсикологический вестник. - 1999. - №6. - С.8-12.