WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 21 |

Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и в отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре

-- [ Страница 3 ] --

Изучение наличия капсулы проводили путём окраски мазков методом негативного конрастирования капсул (Burri R., 1909) и методом позитивного изображения капсул по модифицированному методу А. Н. Книга [111]. Дальнейшую идентификацию аэробных и факультативно-анаэробных бактерий проводили с использованием первично дифференцирующих сред и коммерческих тест-систем в зависимости от группы микроорганизма. Для грамотрицательных бактерий использовали среду Клиглера, цитрат Симмонса, агар для определения подвижности. Окончательную дифференциацию грамотрицательных бактерий проводили при работе ручными методиками с использованием коммерческих тест-систем для энтеробактерий ММТЕ 1 и ММТЕ 2 («Иммунотекс», Россия), для НГОБ — НЕФЕРМ-тест 24 (PLIVA – Lachema Diagnoatica, Чехия). При идентификации культур на автоматическом анализатореVitek 2 использовали карты для идентификации Gram-Negative identification card, предназначенные для идентификации большинства клинически важных ферментирующих и неферментирующих грамотрицательных палочек. Карта содержит 47 биохимических тестов. Для дифференциации грамположительных кокков, при работе ручными методами, использовали коммерческие тесте-системы Стафитест-24 (производство PLIVA – Lachema Diagnoatica, Чехия), Pastorextmstrep— сенсибилизированный латекс для дифференциации Streptococcus групп A,B,C,D,F,G (BIO-RAD, Франция), оптохиновый тест, тест с желчью. При идентификации на автоматическом анализаторе использовали карты для идентификации грамположительных микроорганизмов Gram-Positive identification card, предназначенные для идентификации клинически важных грамположительных микроорганизмов. Карта содержит 43 биохимических теста.

При работе с дрожжевыми грибами — посев первичного материала проводили на агар Сабуро с добавлением хлорамфеникола, культуры термостатировали при 30° С в течение 24-72 часов. При обнаружении колоний с характерной морфологией готовили микроскопические препараты, окрашенные по Граму. При обнаружении в мазках крупных грамположительных почкующихся сферических клеток проводили посев подозрительной культуры на хромогенный агар для дифференциации Кандид (HiMedia), окончательную дифференциацию проводили с использованием Candida-тест (PLIVA – Lachema Diagnoatica, Чехия).

Продолжительность полного бактериологического анализа на аэробы и факультативные анаэробы составляла 2-4 суток.

Определение чувствительности к антибактериальным препаратам В настоящее время большинство исследований при определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам руководствуются стандартами Института клинических и лабораторных стандартов США (Clinical and Laboratory Standarts Institute — CLSI) и отечественными методическими указаниями МЗ РФ:

МУК 4.2.1890-04. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам проводили двумя методами: методом диффузии в агар с помощью стандартных дисков производства ЗАО НИЦФ (г. Санкт-Петербург) и автоматизированным методом. Определение чувствительности методом диффузии в агар с помощью стандартных дисков проводили согласно требованиям Методических указаний «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам»

(МУК 4.2.1890-04). Для этого суточную чистую культуру микроорганизмов, выращенную на плотной среде, стерильным ватным тампоном инокулировали в физиологический раствор в концентрации 1,510 8 КОЕ/мл по оптическому стандарту мутности. На плотную питательную среду инокулюм исследуемой культуры наносили с помощью стерильного ватного тампона, распределяли его по всей поверхности штриховыми движениями в трёх направлениях и помещали диски с антибиотиками. Результаты метода диффузии в агар учитывали в соответствии с инструкцией по применению дисков. Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам представлена в таблице 6.

Интерпретация значений диаметров зон задержки роста микроорганизмов Антибактериальные препараты мм.) Азитромицин Hemophilus spp.

Ампициллин Ко-тримоксазол (бисептол) Тетрациклин Хлорамфеникол Hemophilus spp.

При изучении антибиотикочувствительности автоматизированным методом на анализаторе Vitek 2 использовали карты для определения чувствительности к антибиотикам Antimicrobial Susceptibility Testcard (AST). Карты AST предназначены для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК). Карта AST представляет собой минимизированный аналог метода серийных двукратных разведений в микрообъёмах. Наряду с МПК используются категории — чувствительный, умеренно устойчивый, устойчивый. Экспертная система анализатора позволяет выявлять продукцию БЛРС и проводить прогнозирование антибиотикочувствительности к различным группам антибактериальных средств на основе полученных данных для конкретного штамма микроорганизма.

Выявление резистентности к метициллину (оксациллину) S. aureus проводили методом скрининга. Для определения чувствительности использовали оксациллин ввиду его более высокой стабильности при хранении по сравнению с метициллином.

Использовали чистые культуры S. aureus, инкубированные в течение 18- часов на кровяном агаре, агаре Мюллера-Хинтона с 4% NaCl с добавлением субстанции оксациллина с известной активностью.

Наносили бактериальную взвесь S. aureus с мутностью 0,5 по МакФарланду (1,5х108 КОЕ/мл) на поверхность агара с оксациллином. Штаммы S. aureus инкубировали при температуре 350С в течение полных 24 часов.

Исследование проводили при обязательном контроле роста испытуемых культур на агаре Мюллера-Хинтона с 4% NaCl без оксациллина (культуру наносили так же, как на агар с оксациллином). Использовали контрольные штаммы S.

aureus АТСС 38591 —резистентный к оксациллину, S. aureus АТСС.

Появление видимого роста более 1 колонии на месте нанесения культуры означало устойчивость данного штамма к оксациллину (метициллину), при отсутствии роста на месте нанесения культуры исследуемый штамм считали чувствительным к оксациллину (метициллину).

Метициллино - (оксациллино) резистентные стафилококки расценивали как резистентные ко всем - лактамным антибиотикам — пенициллинам, цефалоспоринам, карбапенемам, комбинациям пенициллинов с ингибиторами -лактамаз.

Выявление - лактамаз расширенного спектра у грамотрицательных бактерий проводили с помощью фенотипических методов.

Включение в перечень антибиотиков при определении чувствительности выделенных штаммов Klebsiella spp. цефалоспоринов III поколения (цефтазидима, цефотаксима, цефтриаксона, цефоперазона) позволяло проводить скрининг всех исследуемых штаммов на возможность продукции БЛРС и последующее проведение подтверждающих исследований с подозрительными штаммами.

После выявлений штаммов Klebsiella spp., подозрительных на продукцию БЛРС проводили фенотипический тест.

Для приготовления инокулюма использовали чистую суточную культуру исследуемого микроорганизма, выращенную на агаризированной среде. Готовили инокулюм, соответствующий стандарту мутности 0,5 по Мак-Фарланду (1,5х КОЕ/мл).

Инокулировали бактериальную суспензию на поверхность агара МюллерХинтона и накладывали диски с цефотаксимом, цефтазидимом (по 30 мкг на диск), а также диски, содержащие комбинации цефотаксим+клавуланат и цефтазидим+клавуланат (30 мкг цефалоспорина+10 мкг клавуланата). Диски цефалоспорин+клавуланат готовили в лаборатории ex tempore. Посевы инкубировали в термостате при 350С в течение 18-20 часов.

Штамм Klebsiella spp. считали продуцентом БЛРС, если диаметр зоны задержки роста вокруг диска с комбинацией цефалоспорина и клавуланата на 5,0 мм и более превышал диаметр зоны вокруг диска с цефалоспорином.

Параллельно с анализом испытуемых культур проводили исследование контрольных штаммов: E. coli АТСС 25922 —отрицательный контроль (БЛРС «-»), K.

pneumoniae АТСС 700603 — положительный контроль (БЛРС «+»).

Для подтверждения продукции металло-бета-лактамаз класса В у НГОБ использовали фенотипический тест. Тестирование выполнено методом «двойных дисков»: диски с имипенемом, меропенемом и ингибитором металло-беталактамаз класса В — ЭДТА.

Внутренний контроль качества определения чувствительности Для обеспечения надлежащего качества определения чувствительности, клинических изолятов микроорганизмов к антибактериальным препаратам, в нашей бактериологической лаборатории проводится внутренний контроль качества.

Для внутреннего контроля качества определения чувствительности в лаборатории использовали контрольные штаммы микроорганизмов. Контрольные штаммы представляют собой генетически стабильные микроорганизмы, обладающие определенными фенотипами чувствительности. В данном исследовании использовали контрольные штаммы Американской коллекции типовых культур (АТСС).

Все используемые штаммы имеют соответствующую документацию, содержащую характеристику штаммов. Использовали основной набор контрольных штаммов:

E. coli ATCC 25922 — для тестирования бактерий, относящихся к семейству энтеробактерий и для выявления БЛРС у грамотрицательных бактерий;

P. aeruginosa АТСС 27853 — для тестирования Pseudomonas spp. и других неферментирующих бактерий;

K. pneumoniae АТСС 700603 — для выявления продукции БЛРС у грамотрицательных бактерий;

S. aureus АТСС 29213 для тестирования Staphylococcus spp. методом серийных разведений;

S. aureus АТСС 25923 для тестирования Staphylococcus spp. дискодиффузионным методом;

S. aureus АТСС 38591 для тестирования чувствительности Staphylococcus spp. к метициллину;

H. influenzae АТСС 49247 для тестирования H. influenzae;

S. pneumoniae АТСС 49619 для тестирования S. pneumoniae и Streptococcus spp.

Контрольные штаммы тестировали еженедельно параллельно с определением чувствительности клинических изолятов, а также при получении новой партии агара и новой партии дисков и тест-систем с антибиотиками.

Если при тестировании контрольных штаммов диаметры зон подавления роста попадали в допустимый диапазон, то результаты определения чувствительности клинических штаммов считали корректными и использовались для выбора антибактериальной терапии. В противном случае выясняли причину получения ошибочного результата, повторно определяли чувствительность контрольного и клинического штамма.

Мониторинг тенденции распространения резистентных штаммов Ввод, статистическую обработку и анализ данных проводили с помощью «Системы микробиологического мониторинга «МИКРОБ» [127,128], программного пакета «WHONET 5.2» (ВОЗ) и пакета программ Microsoft Office Excel для Windows 7. Поскольку данное исследование не носило сравнительного характера, для анализа его результатов использованы методы описательной статистики:

частоты, проценты, частотные распределения и т. п.

Личное участие автора в получении результатов Личное участие соискателя в получении результатов, изложенных в диссертации, заключалось в подборе клинического материала, представленного врачами отделений стационара Фишер В.В, Юрин С.В., Душин Р.В., в проведении микробиологической части (нативные мазки, культуральный посев). Все выделенные культуры микроорганизмов автором совместно с сотрудниками лаборатории клинической микробиологии Ставропольской краевой клинической больницы врачом-бактериологом Нициевской Т. А., биологом Горбачевой Е. А. идентифицированы с использованием тест-систем и современного бактериологического анализатора Vitek 2 (bioMrieux, Франция) и протестированы на атибиотикорезистентность ручными и автоматизированными методами. Автор лично провел анализ и систематизировал полученные результаты. Соискатель в соавторстве разработал Методические указания по практическому использованию микробиологического мониторинга в лечебном процессе гнойно-воспалительных заболеваний.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 21 |
 


Похожие материалы:

« Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ Специальность 03.01.02 – биофизика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук. Научный руководитель доктор физико-математических наук Мальцев В.П. Новосибирск – 2011 Содержание Введение Глава 1 Обзор литературы 1.1. “Лиганд” и “рецептор”. Типы клеточных рецепторов ...»

« 'Oi.200.7 1 5 5 9 3 МИНАЕВА Любовь Валерьевна ^/-/eMaci^cL^ ЭКСПЕРРТМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РОЛИ ИЗМЕНЕНИЙ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В РЕАЛИЗАЦИИ ПОБОЧНЫХ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ПОВТОРНОГО ВВЕДЕНИЯ ЦРЖЛОФОСФАНА 14.00.20 - токсикология, 03.00.04 - биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук профессор А.И.Карпищенко кандидат медицинских наук С.И.Глушков САНКТ- ПЕТЕРБУРГ 2007 2 ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ...»

« ЛАРИОНОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ РАЗНООБРАЗИЕ СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ НА ГРАДИЕНТЕ КОНТИНЕНТАЛЬНОСТИ КЛИМАТА В ХАКАСИИ 03.00.05 – БОТАНИКА Научный руководитель Ермаков Николай Борисович д.б.н., с.н.с. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск - 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования Цели и задачи исследования Защищаемые положения Научная новизна Практическая значимость Апробация работы и публикации Благодарности ГЛАВА 1. ...»

«Кочерина Наталья Викторовна АЛГОРИТМЫ ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО УЛУЧШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ Специальность 03.00.15 – Генетика Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН В. А. Драгавцев Санкт–Петербург – 2009 2 Оглавление Глава I. Введение…………………………………………………….……….…4 О реальной природе организации сложных полигенных экономически важных признаков растений…….……………………9 Глава II. Постановка задач ...»

« ГАЛКИНА МАРИЯ АНДРЕЕВНА БИОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНВАЗИОННЫХ ВИДОВ РОДА BIDENS L. В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ 03.02.01 – БОТАНИКА ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК Научный руководитель д.б.н. Виноградова Ю.К. Москва – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение ……………………………………………………………………….4 Глава 1. Объекты и методы ………………………………………………….10 Глава 2. История распространения инвазионных видов рода Bidens L. на территории Европы …………………………………… Глава 3. ...»

« Никитенко Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Борок – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 3 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ГЛАВА 2. ФИЗИКО–ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 17 ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 36 ГЛАВА 4. МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО ...»

« Вознийчук Ольга Петровна ПРОСТРАНСТВЕННАЯ СТРУКТУРА И ОРГАНИЗАЦИЯ НАСЕЛЕНИЯ НАЗЕМНЫХ ПОЗВОНОЧНЫХ ЦЕНТРАЛЬНОГО АЛТАЯ 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Ю.С. Равкин Горно-Алтайск – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………….….….4 ГЛАВА 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ, РАЙОН РАБОТ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ………………………….…………………………….…………….….9 1.1. История изучения фауны Центрального ...»

« ТОКРАНОВ АЛЕКСЕЙ МИХАЙЛОВИЧ ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИИ ДОННЫХ И ПРИДОННЫХ РЫБ РАЗЛИЧНЫХ СЕМЕЙСТВ В ПРИКАМЧАТСКИХ ВОДАХ 03.00.10 – ихтиология Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук Петропавловск-Камчатский – 2009 2 Официальные оппоненты: доктор биологических наук, член-корреспондент РАН Черешнев Игорь Александрович доктор биологических наук Долганов Владимир Николаевич доктор биологических наук, профессор Шунтов Вячеслав Петрович ...»







 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.