WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     | 1 |   ...   | 21 | 22 || 24 | 25 |   ...   | 57 |

Экологические основы и подходы к управлению численностью синантропных видов грызунов (на примере серой крысы rattus norvegicus berk.)

-- [ Страница 23 ] --

долгосохраняющихся маркеров в составе живой костной ткани. В мертвой костной ткани тетрациклин сохраняется неограниченно долго. В газете «Московские новости» (1980, декабрь 20-22, с.3) было сообщение о находке тетрациклина в костях древних египтян. Вопрос о том, как он туда попал, остается дискуссионным, однако факт почти 1400-летнего сохранения тетрациклина в костной ткани говорит сам за себя. В соединении с костной тканью АГТ устойчивы к длительному кипячению в воде, однако длительная экспозиция в ультрафиолетовом свете или формалине снижает интенсивность флуоресценции. В кислой среде, в результате декальцинации кости, АГТ переходит в раствор, где со временем разрушается. В кислой и сильнощелочной среде АГТ малоустойчивы.

Первой попыткой использования АГТ в зоологии стало мечение с целью изучения подвижности и дальности перемещений различных животных. Во многих странах с помощью 0,5% деметилхлортетрациклина в составе пищевых приманок метили оппоссумов, койотов, серых, черных и полинезийских крыс, а в нашей стране с помощью тетрациклина, окситетрациклина и хлортетрациклина метили сусликов, лесных и домовых мышей, рыжих полевок, серых крыс. Изучена дальность и направление перемещения отдельных животных в зависимости от пола и возраста. Например, показано, что на рисовых полях Филлипин черные (Lavoie et al, 1971), а на рисовых полях Кубани (Россия) – серые крысы ведут себя сходным образом, покидая участки, где в результате агротехнических мероприятий ухудшаются условия их обитания (Рыльников и др., 1983).

А.В.Беляченко установил, что при попадании АГТ в организм молодых зверьков с молоком матери флуоресценция маркера обнаруживается в центральных участках черепномозговых костей, в то время как у молодняка, самостоятельно поедавшего приманку с АГТ, флуоресцируют только швы, места соединения костей черепа. Это связано с тем, что с возрастом у молодых особей остеобразующие элементы смещаются от центра черепно-мозговых костей к их периферии. Однако это позволяет установить, на каком этапе развития произошло мечение животного, а поэтому существенно расширяет внутрипопуляционных группировок, сроков расселения молодняка (Беляченко, 1984).

Г.А.Клевезаль установила, что по расположению метки на поперечном срезе верхних резцов грызунов можно с точностью до ±2 суток установить время поедания приманки с тетрациклином. С помощью этой методики ею показано, что обыкновенный хомяк, например, съедает запасенный им корм не ранее, чем через неделю (Клевезаль, 1984). Еще раньше Краером (Crier, 1970) показана возможность прижизненного обнаружения метки тетрациклина на стачиваемой поверхности резца серой крысы через 2 недели с момента попадания тетрациклина в ее организм и в течение последующих 6 недель до полного стачивания старой части резца. Воспользовашись этим, мы разработали метод приготовления шлифа поперечного среза резца грызунов, не умерщвляя их. С помощью карборундового диска диаметром 10 мм, насаженного на вал электромоторчика (4,5 В; 3,5 А), у зафиксированного грызуна отрезали кончик резца ниже края десны. Операция проходит для животного без потерь, через несколько дней резец отрастает вновь. Это позволяет следить за динамикой потребления корма в течение всего срока его жизни путем повторного отлова и взятия кончика резца (рис. 10).

2.1.3.1. Извлечение АГТ из костной ткани и их хроматографирование Для того чтобы увеличить информативность результатов применения метода мечения АГТ, нами были разработаны другие методики извлечения смеси антибиотиков группы тетрациклина, а именно: тетрациклина (Т), хлортетрациклина (ХТ), окситетрациклина (ОТ) и метациклина (МЦ), из костей грызунов и их последующей идентификации с помощью бумажной хроматографии (рис. 11).

Это позволило нам метить животных разными маркерами в нескольких местах (Рыльников и др., 1981). Визуальное различение флуоресценции разных хелатных комплексов вышеупомянутых АГТ практически невозможно. Среди существующих инструментальных методов идентификации АГТ применялись:

спектрофотометрические, колориметрические, полярографические, хроматографические (на бумаге).

Наиболее простой и достаточно чувствительный метод – хроматография на бумажных дисках. В ультрафиолетовом свете АГТ обнаруживаются по флуоресценции на бумаге, а выявить по желтой окраске при естественном освещении (Блинов, Хохлов, 1970). Однако, прежде чем провести идентификацию, необходимо выделить маркер из кости.

Предложен (Titus et al, 1958) метод выделения тетрациклина из костей путем экстракции 0,1 Н раствором HCl, при этом происходит разрушение хелата Т с Са++. Оказавшийся в растворе Т осаждают вместе с гидратом окиси кальция при подщелачивании раствора. Основной недостаток предложенного метода заключается в том, что для приготовления раствора, который необходимо проанализировать с помощью хроматографии на бумажных дисках, требуется растворять осадок в минимальном количестве соляной кислоты, но так как этот осадок состоит преимущественно из Са (ОН)2, раствор получается очень разбавленным. С целью преодоления указанного недостатка нами предложен способ извлечения АГТ из солянокислого раствора органическими растворителями при кислых значениях рН. Метод позволяет использовать для нанесения на хроматограмму растворы смесей АГТ, не содержащие неорганических примесей, и заключается в следующем.

Маркеры подаются в составе приманки из расчета по 400 мг/кг.

Многокомпонентная смесь, состоящая из 4-х АГТ, содержала по 100мг/кг каждого антибиотика.

Флуоресцирующие части, как правило, эпифизы костей голени, бедра, таза, а также плечевого пояса белых крыс (при высокой концентрации АГТ – другие части), измельчали в ступке и промывали до исчезновения в кусочках кости флуоресценции. Собранный солянокислый раствор фильтровали и помещали в делительную воронку. К этому раствору добавляли этилацетат (1/10 от объема), интенсивно встряхивали 1 мин и оставляли расслаиваться.

АГТ из солянокислого раствора переходят в этилацетат, образуя этилацетатный экстракт. Для повышения коэффициента распределения М.Л.Шемякин с соавт.

(1961) предлагают в солянокислый раствор добавлять NaCl до насыщения.

Процедуру повторяют 3-4 раза. Этилацетатный экстракт высушивают прокаленным безводным Na2SO4. Обезвоженный экстракт упаривают под вакуумом (100 мм рт. ст.) при t=400С досуха. Осадок на стенках колбочки растворяют в минимальном количестве метанола (0,5-1 мл).

Качественный анализ АГТ в метаноле осуществляют с помощью Обнаружение проводят в системе нитрометан : бензол : пиридин (60:30:5).

Перед помещением хроматограммы с нанесенными на нее растворами испытуемых веществ в камеру ее опрыскивают буфером Мак Ильвейна /0,1М лимонная кислота – 0,2 М Na2HPO4 (10,86:9,0)/ с рН=4,5. После того, как фронт растворителя уйдет на 14-15 см от центра, хроматограмму высушивают на воздухе, проявляют выдерживанием в парах аммиака и помещают под лампу ультрафиолетового света (Лазникова, Макаревич, 1964). Использовали осветитель для люминесцентной диагностики «ОЛД-41», снабженный лампой низкого давления ЛУФ-4.

В случае, если немедленная обработка костей невозможна, их хранят в темном сухом месте при температуре 0-20 С. При этом АГТ в костях не теряют своих свойств в течение 5-6 месяцев (срок наблюдения). Фиксация в формалине недопустима (Lavoie et al., 1971; наши данные).

При изучении разделения стандартных смесей «свидетелей»: ХТ, доксициклина (ДЦ), Т, МЦ, ОТ, показано, что все они отчетливо разделяются.

Значения Rf для вышеупомянутой последовательности АГТ соответственно равны 0,45, 0,34, 0,28, 0,22, 0,14.

2.1.3.2. Полуколичественный метод определения антибиотиков группы тетрациклина в резцах серых крыс Г.А.Клевезаль (1984) для изучения питания грызунов в естественных условиях предложила добавлять к корму АГТ. На поперечном шлифе резцов (в первой четверти от края стачиваемой поверхности) у грызунов, потребляющих корм с АГТ, в лучах ультрафиолетового света при 30-50-кратном увеличении под бинокуляром хорошо заметны концентрические полосы желтого цвета, образованные хелатным комплексом АГТ с кальцием. Такие полосы образуются при ежесуточном потреблении приманки с маркером и сохраняются в течение 2-х месяцев (срок полного обновления верхнего резца у серой крысы). В зависимости от количества тетрациклина, попавшего в организм серой крысы, эти полосы имеют различную интенсивность свечения от слабо желтых до ярко желтых оттенков. Для получения эталонных образцов лабораторным крысам перорально в виде водного раствора вводили гидрохлорид тетрациклина в количествах от 0,1 до 50 мг на 1 кг массы тела в течение 3-х последовательных дней. Под наркозом у живых крыс, с помощью миниатюрного карборундового диска с электроприводом, отпиливали выступающую часть резца, из которой изготавливали поперечный шлиф толщиной не более 0,5 мм. С помощью смеси воска с канифолью (2:1) шлифы прикрепляли к краю предметного стекла. Эталонные шлифы использовали для определения количества тетрациклина, попавшего в организм диких крыс в процессе их контакта с приманкой, меченой этим маркером (обычно 0,5% тетрациклина к весу приманки). Для этого под бинокуляром в лучах отраженного ультрафиолетового света сравнивали испытуемые шлифы с эталонными путем тесной стыковки. Под оттенок испытуемого образца подбирали соответствующий оттенок эталонного образца, соответствующего известной дозе тетрациклина. Если вместе с тетрациклином в приманке, поеденной крысами, присутствовала субстанция ратицидного действия в известной концентрации, то по соотношению концентраций входящих компонентов легко рассчитать примерную дозу яда, попавшего в организм крысы ежесуточно. Возможность прижизненного изъятия части резца (одного из двух) позволяет повторять такую процедуру 1 раз в полтора – два месяца.

(выполнено в рамках научно-исследовательской работы во ВНИИ дезинфекции и стерилизации МЗ СССР В.А.Беленьким под руководством автора) О рационе кормов крыс судили преимущественно по содержимому желудков, в меньшей мере – по остаткам на "кормовых столиках".

Эталонные образцы переваренных кормов были получены путем скармливания лабораторным белым крысам дождевых червей, лягушек, белых мышей, виноградных улиток, рыбы, а также вегетативных частей растений (злаки, осоки, бобовые) и их семян (рис, пшеница, просо). Через 2, 4, 6 часов после поедания этих кормов забивали по 2 крысы для изучения отличительных особенностей пищи на разных стадиях переваривания.

Исследование соотношения кормов в желудках проводили по двум критерям: по частоте встречаемости данного вида корма и по его процентному содержанию. Фиксированное в 4%-ном растворе формалина содержимое желудков серых крыс изучали под бинокуляром, сравнивая с полученными ранее эталонными образцами. Путем визуального осмотра содержимого желудков серых крыс определяли наиболее характерные остатки, далее определение проводили а зависимости от количества слизи в желудке: при небольшом количестве слизи содержимое обрабатывали смесью спиртового раствора йода с йодистым калием для разделения на растительные и животные остатки. При этом растительные остатки окрашивались синим цветом за счет включенного в них крахмала, а животные – фиолетово-красным. Животные остатки отделяли от растительных для более точного определения путем сравнения с эталонами.

Содержимое желудков с большим количеством слизи делили пополам. Из одной половины слизь вымывали и собирали в чашке Петри, где ее осаждали поваренной солью. Кусочки, оставшиеся после отмывания от слизи, определяли по описанной выше схеме. Воду из чашки сливали, а осажденную слизь обрабатывали с целью идентификации остатков растительного или животного происхождения.



Pages:     | 1 |   ...   | 21 | 22 || 24 | 25 |   ...   | 57 |
 


Похожие материалы:

« Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и в отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Андрей Юрьевич Миронов доктор медицинских наук Елена Васильевна Алиева Ставрополь — 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ...»

« Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ Специальность 03.01.02 – биофизика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук. Научный руководитель доктор физико-математических наук Мальцев В.П. Новосибирск – 2011 Содержание Введение Глава 1 Обзор литературы 1.1. “Лиганд” и “рецептор”. Типы клеточных рецепторов ...»

« 'Oi.200.7 1 5 5 9 3 МИНАЕВА Любовь Валерьевна ^/-/eMaci^cL^ ЭКСПЕРРТМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РОЛИ ИЗМЕНЕНИЙ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В РЕАЛИЗАЦИИ ПОБОЧНЫХ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ПОВТОРНОГО ВВЕДЕНИЯ ЦРЖЛОФОСФАНА 14.00.20 - токсикология, 03.00.04 - биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук профессор А.И.Карпищенко кандидат медицинских наук С.И.Глушков САНКТ- ПЕТЕРБУРГ 2007 2 ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ...»

« ЛАРИОНОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ РАЗНООБРАЗИЕ СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ НА ГРАДИЕНТЕ КОНТИНЕНТАЛЬНОСТИ КЛИМАТА В ХАКАСИИ 03.00.05 – БОТАНИКА Научный руководитель Ермаков Николай Борисович д.б.н., с.н.с. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск - 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования Цели и задачи исследования Защищаемые положения Научная новизна Практическая значимость Апробация работы и публикации Благодарности ГЛАВА 1. ...»

«Кочерина Наталья Викторовна АЛГОРИТМЫ ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО УЛУЧШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ Специальность 03.00.15 – Генетика Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН В. А. Драгавцев Санкт–Петербург – 2009 2 Оглавление Глава I. Введение…………………………………………………….……….…4 О реальной природе организации сложных полигенных экономически важных признаков растений…….……………………9 Глава II. Постановка задач ...»

« ГАЛКИНА МАРИЯ АНДРЕЕВНА БИОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНВАЗИОННЫХ ВИДОВ РОДА BIDENS L. В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ 03.02.01 – БОТАНИКА ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК Научный руководитель д.б.н. Виноградова Ю.К. Москва – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение ……………………………………………………………………….4 Глава 1. Объекты и методы ………………………………………………….10 Глава 2. История распространения инвазионных видов рода Bidens L. на территории Европы …………………………………… Глава 3. ...»

« Никитенко Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Борок – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 3 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ГЛАВА 2. ФИЗИКО–ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 17 ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 36 ГЛАВА 4. МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО ...»

« Вознийчук Ольга Петровна ПРОСТРАНСТВЕННАЯ СТРУКТУРА И ОРГАНИЗАЦИЯ НАСЕЛЕНИЯ НАЗЕМНЫХ ПОЗВОНОЧНЫХ ЦЕНТРАЛЬНОГО АЛТАЯ 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Ю.С. Равкин Горно-Алтайск – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………….….….4 ГЛАВА 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ, РАЙОН РАБОТ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ………………………….…………………………….…………….….9 1.1. История изучения фауны Центрального ...»

« ТОКРАНОВ АЛЕКСЕЙ МИХАЙЛОВИЧ ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИИ ДОННЫХ И ПРИДОННЫХ РЫБ РАЗЛИЧНЫХ СЕМЕЙСТВ В ПРИКАМЧАТСКИХ ВОДАХ 03.00.10 – ихтиология Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук Петропавловск-Камчатский – 2009 2 Официальные оппоненты: доктор биологических наук, член-корреспондент РАН Черешнев Игорь Александрович доктор биологических наук Долганов Владимир Николаевич доктор биологических наук, профессор Шунтов Вячеслав Петрович ...»







 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.