WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS


Pages:     | 1 |   ...   | 9 | 10 || 12 | 13 |   ...   | 31 |

Ульянова онега владимировна методология повышения безопасности бактериальных вакцин на модели вакцинных штаммов brucella abortus 19 ba, francisella tularensis 15 нииэг, yersinia

-- [ Страница 11 ] --

Безопасность живых вакцин оценивают по методам, указанным в ГОСТах, Методических указаниях и других нормативных документах, регламентирующих требования к вакцинам. В частности безопасность живых вакцин B. abortus 19 BA и F. tularensis чувствительных животных. Оценку безвредности, остаточной вирулентности и реактогенности вакцинного штамма B. abortus 19 BA проводят на морских свинках, белых мышах и телятах согласно ГОСТу 18589-73 «Вакцина живая сухая против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма № 19» (1997). Оценку аналогичных показателей вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ проводят на морских свинках и белых мышах по методическим указаниям «Основные требования к вакцинным штаммам туляремийного микроба: МУ 3.3.1.2161—07»

(2007). Следуя требованиям этих нормативных документов, для оценки безопасности живых вакцин необходимо выполнение следующих условий: проведение экспериментов с использованием разных видов чувствительных животных;

лабораторные животные должны содержаться в условиях вивария, на стандартном рационе; для получения полной и объективной информации о состоянии привитых лабораторных животных в эксперименте должно быть несколько опытных и обязательно контрольная группа животных; проводится широкий спектр исследований, включающий биологические, патоморфологические, гистологические и другие эксперименты, что, безусловно, является процессом длительным, требующим значительных финансовых затрат.

Учитывая вышесказанное, немаловажным, на наш взгляд, является разработка новейших высокоинформативных методов оценки безопасности вакцин. Разработка и создание компьютеризированных диагностических комплексов, включающих биосистему (микроорганизм – лабораторное животное) и физический датчик для биосенсорном звене.

Известно применение метода спекл-имиджинга, в англоязычной литературе этот метод называется LASCA (от английского Laser Speckle Contrast Analysis), для гемодинамики проводятся in vivo в режиме реального времени, без трепанации черепа (Briers, Webster, 1996; Briers, 2001; Dunn et al., 2001; Yu et al., 2004; Draijer et al., 2006; Kruijt et al., 2006; Li et al., 2006; Zhu et al., 2007; Miao et al., 2010; Kalchenko et al., 2011). Другим современным методом определения состояния микрососудов и движения крови в них является метод спекл-микроскопии (Galanzha et al., 2002).

Впервые этот метод был применен для измерений потоков крови в отдельном сосуде ретины глаза в начале семидесятых годов прошлого века (Riva, 1972; Mishina, 1974).

В настоящее время с помощью этого метода было проведено изучение лимфо- и гемодинамики сосудов брыжейки белых крыс в норме и при патологии (Riva, 1972;

Mishina, 1974; Aizu et al., 1989, 1991, 1992, 1998, 2000; Брилль, 1992, 2001; Галанжа, 2002; Ульянов, 1994; Galanzha, 2000, 2001, 2002; Solovva, 2001; Zharov, 2002, 2003;

Ul’yanov, 1995, 1997, 1998, 2001; Tuchin, 1999). Сообщений об использовании перечисленных методов для оценки реактогенности бактериальных вакцинных штаммов на морских свинках, нами не обнаружено.

Таким образом, из представленного анализа литературы очевидно, что на сегодняшний день наиболее эффективными средствами профилактики бруцеллеза, туляремии и чумы в РФ и некоторых странах СНГ являются лицензированные живые аттенуированные вакцины B. abortus 19 BA, F. tularensis 15 НИИЭГ и Y. pestis EV НИИЭГ.

Однако в настоящее время особо актуальным является разработка фундаментальных основ повышения безопасности живых вакцин для более широкого их применения.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектами исследования являлись штаммы грамотрицательных бактерий:

Escherichia coli В6, E. coli K12, E. coli О1; Pseudomonas aeruginosa ATCC 27533, P. aeruginosa ATCC 27853; а также вакцинные штаммы Brucella abortus 19 BA;

Francisella tularensis 15 НИИЭГ; Yersinia pestis EV НИИЭГ.

Штаммы E. coli В6, E. coli К12, E. coli О1, P. aeruginosa ATCC 27533 были получены из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ГИСК имени Л.А. Тарасевича, г. Москва; культура P. aeruginosa ATCC 27853 – American Type Culture Collection, США; вакцинные штаммы B. abortus 19 BA, F. tularensis 15 и Y. pestis EV – Государственной коллекции патогенных бактерий ФКУЗ «РосНИПЧИ «Микроб», г. Саратов, а так же ФГУП «НПО «Микроген», г. Омск.

Для выращивания микроорганизмов использовали следующие питательные среды: E. coli spp. – агар Эндо, ГРМ бульон, ГРМ агар, рН 7,3; МПА, рН 7,2;

P. aeruginosa 27533 – ГРМ бульон, ГРМ агар, рН 7,3 МПА, рН 7,2; P. aeruginosa 27853 – Difco Bacto-agar, рН 7,4 (Difco Laboratories, Detroit Michigan, USA);

B. abortus 19 BA – эритрит агар и эритрит бульон, рН 7,2; F.tularensis 15 – FT агар, pН 7,0 и МПА, рН 7,2; Y. pestis EV – Bacto Heart Infusion Broth (HIB), pH 7,4 (Becton, Dickinson and Company, USA). Питательные среды: агар Эндо, ГРМ бульон, ГРМ агар, МПА, бруцеллагар, FT агар - приобретены в ФБУН «ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии» Роспотребнадзора М.о., п. Оболенск, Россия.

Л.А. Тарасевича, г. Москва, Россия) в 0,85% растворе хлорида натрия.

Работу с бактериями вакцинных штаммов B. abortus 19 BA; F. tularensis НИИЭГ; Y. pestis EV НИИЭГ (III группа ПБА) и E. coli В6, E. coli K12, E. coli О1;

P. aeruginosa ATCC 27533, P. aeruginosa ATCC 27853 (IV группа ПБА) (Безопасность работы …, http://www.opengost.ru) проводили согласно Санитарным правилам "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами. СП 1.2.731-99" и Санитарно-эпидемиологическим правилам "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и http://www.opengost.ru).





2.2. Методы оценки жизнеспособности, культурально-морфологических Жизнеспособность микроорганизмов до и после инактивации методом ФДВ колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий E. coli B6, E. coli O1, E. coli K12, P. aeruginosa 27533, P. aeruginosa 27853, B. abortus 19 BA, F. tularensis 15, Y. pestis EV. С этой целью высевали 0,1 мл бактериальной взвеси в концентрации 110 3 м.к./мл на соответствующие культуре плотные питательные среды. Посевы инкубировали при температуре 37 С в течение 10 сут, с последующим подсчетом числа выросших колоний (Теппер с соавт., 2004).

Культуральные свойства бактерий, использованных в эксперименте, до и после инактивации методом ФДВ изучали по характерной морфологии роста колоний на плотных питательных средах. Для бактерий E. coli spp., P. aeruginosa 27533, B. abortus 19 BA и Y. pestis EV оценивали также характер роста в бульоне.

Морфологические свойства бактерий E. coli spp., P. aeruginosa 27533, B. abortus BA и Y. pestis EV исследовали в мазках, окрашенных по Граму; бактерий вакцинного штамма F. tularensis 15 – в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

Серологические свойства бактерий вакцинного штамма B. abortus 19 BA до и после инактивации методом ФДВ определяли методом постановки реакции агглютинации (РА) в пробирках со специфической агглютинирующей бруцеллезной сывороткой до ее предельного титра (Инструкция по применению …, 1973), а также в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с использованием диагностикума бруцеллезного эритроцитарного иммуноглобулинового (Профилактика и лабораторная …, 2003; Инструкция по применению диагностикума эритроцитарного бруцеллезного иммуноглобулинового жидкого. НИПЧИ, http://snipchi.ru).

Серологические свойства бактерий вакцинного штамма F. tularensis 15 до и после инактивации методом ФДВ изучали по продукции специфических антигенов в РА иммуноглобулинового (Приказ МЗ РФ № 125, 1999; Инструкция по применению диагностикума эритроцитарного туляремийного иммуноглобулинового сухого, http://www.medsovet.info).

Серологические свойства бактерий вакцинного штамма Y. pestis EV до и после инактивации методом ФДВ исследовали в РНГА с использованием диагностикума чумного эритроцитарного иммуноглобулинового (Инструкция по применению диагностикума эритроцитарного чумного иммуноглобулинового сухого, http://snipchi.ru).

Для изучения серологических свойств бактерий использовали следующие коммерческие препараты: сыворотку бруцеллезную диагностическую агглютинации жидкую (ФКУЗ «Ставропольский ПЧИ» Роспотребнадзора, г. Ставрополь), сыворотку туляремийную диагностическую для реакции агглютинации сухую (ФКУЗ «Иркутский ПЧИ» Роспотребнадзора, г. Иркутск), диагностикум эритроцитарный бруцеллезный иммуноглобулиновый жидкий (ФКУЗ «Ставропольский ПЧИ» Роспотребнадзора, г. Ставрополь), диагностикум эритроцитарный туляремийный иммуноглобулиновый сухой и диагностикум чумной эритроцитарный иммуноглобулиновый сухой (НИИ микробиологии МО РФ, г. Киров).

Пробы на образование сероводорода и индола бактериями E. coli spp., P. aeruginosa spp. до и после инактивации методом ФДВ проводили, используя системы индикаторные бумажные (СИБ) в соответствии с Инструкцией по применению систем индикаторных бумажных для идентификации микроорганизмов (СИБ) - ФСП 42-0100-3827-03 (Инструкция …, 1973).

2.3. Оценка безопасности вакцинных штаммов F. tularensis 15 НИИЭГ и B. abortus 19 BA по определению остаточной вирулентности, безвредности Безопасность бактерий вакцинных штаммов F. tularensis 15 НИИЭГ и B. abortus 19 BA до и после инактивации методом ФДВ определяли на морских свинках по показателям безвредности, остаточной вирулентности и реактогенности согласно нормативным документам (Бруцеллез …, 1996; Основные требования …, 2007).

Кроме того, оценку реактогенности проводили когерентно-оптическими методами (Ульянов, 1994; Briers, 2001), используя оригинальные компьютеризированные лазерные установки, в состав которых была включена стандартная биосистема — микроорганизм - лабораторное животное.

Для оценки безвредности и остаточной вирулентности регламентированными методами двухсуточные агаровые культуры вакцинных штаммов B. abortus 19 BA или F. tularensis 15 НИИЭГ вводили морским свинкам подкожно в правую паховую область в объеме 1 мл. Контрольным группам животных инокулировали интактные культуры вакцинных штаммов, а опытным – взвеси бактерий, инактивированные методом ФДВ.

Безвредность бактерий B. abortus 19 проверяли на животных после введения м.к./мл. Наблюдали животных в течение 25 дней. По истечении этого срока проводили эвтаназию морских свинок и регистрировали наличие/отсутствие, выраженность макроскопических патологоанатомических изменений, характерных для бруцеллезной инфекции.

Остаточную вирулентность клеток B. abortus 19 BA, введенных в дозах 1·103;

1·104 или 2·109 м.к./мл оценивали по приживаемости бактерий в организме лабораторных животных. Для этого после эвтаназии и вскрытия морских свинок на 35 сут. наблюдения высевали на эритрит агар паховые, подчелюстные, заглоточные, парааортальные лимфатические узлы, печень, селезенку и костный мозг. Посевы инкубировали в термостате при 37 оС в течение 25 сут., просматривая их каждые 3- дня.

Реактогенность бактерий B. abortus 19 BA определяли на морских свинках по результатам опытов по изучению безвредности и остаточной вирулентности. У животных в течение 10 суток после заражения ежедневно регистрировали местную и общую реакции организма, фиксировали температуру и массу тела, отмечали изменения в поведении животных. Состояние регионарных лимфатических узлов и мягких тканей в месте введения оценивали при пальпации.

Для проведения оценки безвредности, остаточной вирулентности и реактогенности бактерий вакцинного штамма F. tularensis 15 культуру вводили морским свинкам в дозе 5109 м.к./мл. Наблюдение за животными осуществляли в течение 30 суток. Затем оценивали морфологические показатели постмортально.



Pages:     | 1 |   ...   | 9 | 10 || 12 | 13 |   ...   | 31 |
 


Похожие материалы:

« СТЕПАНОВ Николай Витальевич СОСУДИСТЫЕ РАСТЕНИЯ ПРИЕНИСЕЙСКИХ САЯН 03.02.14 - Биологические ресурсы Диссертация на соискание учёной степени доктора биологических наук Красноярск 2014 СОДЕРЖАНИЕ 4 Введение Глава 1. История исследования флоры 14 Глава 2. Физико-географические условия. 28 29 2.1. Геоморфология, орогенез, геология 33 2.2. Гидрография 35 2.3. Климат 39 2.4. Почвы 41 2.5. Растительность Глава 3. Материалы и методы исследований. 72 Глава 4. Анализ флоры сосудистых ...»

«НА ПРАВАХ РУКОПИСИ СИГИДА РОМАН СЕРГЕЕВИЧ ОСОБЕННОСТИ ОРГАНИЗАЦИИ РИТМОСТАЗА У ПОДРОСТКОВ С РАЗЛИЧНОЙ АДАПТАЦИЕЙ К УЧЕБНЫМ НАГРУЗКАМ 03.00.13 – ФИЗИОЛОГИЯ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор В.А. Батурин Ставрополь - 2004 2 Принятые сокращения АД –артериальное давление АМо- амплитуда моды АП - адаптационный потенциал ВПМ- вариационная пульсометрия ДАД –диастолическое артериальное давление ДМ –динамометрия ...»

« РЫЛЬНИКОВ Валентин Андреевич ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПОДХОДЫ К УПРАВЛЕНИЮ ЧИСЛЕННОСТЬЮ СИНАНТРОПНЫХ ВИДОВ ГРЫЗУНОВ (на примере серой крысы Rattus norvegicus Berk.) Специальность 03.00.16 – экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Пермь – 2007 2 Оглавление Введение………………………………………………………………………. 7 Глава 1. Обзор литературы 1.1. Экология серой крысы (пасюк)………………………………………… 25 1.1.1. Характеристика питания серой крысы…….………………………… 25 1.1.2. ...»

« Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и в отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Андрей Юрьевич Миронов доктор медицинских наук Елена Васильевна Алиева Ставрополь — 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ...»

« Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ Специальность 03.01.02 – биофизика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук. Научный руководитель доктор физико-математических наук Мальцев В.П. Новосибирск – 2011 Содержание Введение Глава 1 Обзор литературы 1.1. “Лиганд” и “рецептор”. Типы клеточных рецепторов ...»

« 'Oi.200.7 1 5 5 9 3 МИНАЕВА Любовь Валерьевна ^/-/eMaci^cL^ ЭКСПЕРРТМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РОЛИ ИЗМЕНЕНИЙ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В РЕАЛИЗАЦИИ ПОБОЧНЫХ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ПОВТОРНОГО ВВЕДЕНИЯ ЦРЖЛОФОСФАНА 14.00.20 - токсикология, 03.00.04 - биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук профессор А.И.Карпищенко кандидат медицинских наук С.И.Глушков САНКТ- ПЕТЕРБУРГ 2007 2 ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ...»

« ЛАРИОНОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ РАЗНООБРАЗИЕ СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ НА ГРАДИЕНТЕ КОНТИНЕНТАЛЬНОСТИ КЛИМАТА В ХАКАСИИ 03.00.05 – БОТАНИКА Научный руководитель Ермаков Николай Борисович д.б.н., с.н.с. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск - 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования Цели и задачи исследования Защищаемые положения Научная новизна Практическая значимость Апробация работы и публикации Благодарности ГЛАВА 1. ...»

«Кочерина Наталья Викторовна АЛГОРИТМЫ ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО УЛУЧШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ Специальность 03.00.15 – Генетика Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН В. А. Драгавцев Санкт–Петербург – 2009 2 Оглавление Глава I. Введение…………………………………………………….……….…4 О реальной природе организации сложных полигенных экономически важных признаков растений…….……………………9 Глава II. Постановка задач ...»

« ГАЛКИНА МАРИЯ АНДРЕЕВНА БИОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНВАЗИОННЫХ ВИДОВ РОДА BIDENS L. В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ 03.02.01 – БОТАНИКА ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК Научный руководитель д.б.н. Виноградова Ю.К. Москва – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение ……………………………………………………………………….4 Глава 1. Объекты и методы ………………………………………………….10 Глава 2. История распространения инвазионных видов рода Bidens L. на территории Европы …………………………………… Глава 3. ...»

« Никитенко Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Борок – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 3 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ГЛАВА 2. ФИЗИКО–ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 17 ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 36 ГЛАВА 4. МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО ...»








 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.