WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS


Pages:     | 1 |   ...   | 16 | 17 || 19 | 20 |   ...   | 31 |

Ульянова онега владимировна методология повышения безопасности бактериальных вакцин на модели вакцинных штаммов brucella abortus 19 ba, francisella tularensis 15 нииэг, yersinia

-- [ Страница 18 ] --

Клетки B. abortus 19 ВА представляли собой мелкие грамотрицательные овоидные микроорганизмы размерами 0,3х0,6 мкм. Жгутиков не имели, спор и капсул не образовывали. На бруцеллагаре на 2-3 сутки образовывались гладкие, бесцветные, прозрачные, выпуклые (холмиком) колонии в диаметре от 1 до 4 мм, которые на 4- сутки мутнели. В бульоне бактерии штамма B. abortus 19 давали помутнение и образование слизистого осадка (Рисунок 42). Оценка биохимических свойств показала, что бактерии B. abortus 19 обладали уреазной активностью, выделяли сероводород. Указанные бактерии агглютинировались сывороткой бруцеллезной диагностической моноспецифической адсорбированной кроличьей anti-abortus и полностью лизировались Тб фагом. Таким образом, до инактивации методом ФДВ культура B. abortus 19 имела типичные свойства.

В экспериментах по инактивации бактерий вакцинного штамма B. abortus 19 BA использовали взвесь концентрацией 2109 м.к./мл, эквивалентную отраслевому стандартному образцу мутности (ОСО 42-28-85П) 10 МЕ (Методические указания …, 2007) соответствующего года выпуска. Затем, полученную взвесь разводили до содержания 1109 м.к./мл. К бактериальной взвеси добавляли МС в концентрациях 0,0005; 0,005 или 0,05 %. Воздействовали излучением красных светодиов (0 = 650 ± 10 нм), мощностью 0,2; 0,6 и 1 мВт с плотностью мощности 1, 3 и 5 мВт/см2, соответственно. Время инактивации составляло от 5 до 60 мин. Наряду с опытными исследованиями проводили контрольные, учитывая независимое воздействие на бактерии МС и СД. Результаты представлены на рисунках 43-45.

Сравнивая результаты инактивации, следует отметить, что наиболее выраженная бактерицидная активность, при которой количество КОЕ B. abortus 19 снижалось до 5 ± 0,9 %, была после ФДВ (I = 5 мВт/см2) в течение 50 мин при добавлении в бактериальную взвесь МС в концентрации 0,05 %. При использовании концентрации МС = 0,005 % число КОЕ B. abortus 19 снижалось до 9 ± 0,2 % после ФДВ (I = мВт/см2) в течение 60 мин. Минимальная концентрация МС = 0,0005 %, которую Рисунок 42 — Изучение типичных культурально-морфологических свойств штамма B. abortus 19 BA: а – морфология и размеры клеток, б – рост в эритрит бульоне, Рисунок 43 – Изменение числа КОЕ бактерий B. abortus 19 BA (Осд) после ФДВ (1 мВт/см2): экспозиции с МС в концентрациях 0,0005 % (а); 0,005 % (б); 0,05 % (в) в течение 5–60 мин; Кк – контроль культуры; Кмс – контроль культуры с МС;

Рисунок 44 – Изменение числа КОЕ бактерий B. abortus 19 BA (Осд) после ФДВ (3 мВт/см2): экспозиции с МС в концентрациях 0,0005 % (а); 0,005 % (б); 0,05 % (в) в течение 5–60 мин; Кк – контроль культуры; Кмс – контроль культуры с МС;

Рисунок 45 – Изменение числа КОЕ бактерий B. abortus 19 BA (Осд) после ФДВ (5 мВт/см2): экспозиции с МС в концентрациях 0,0005 % (а); 0,005 % (б); 0,05 % (в) в течение 5–60 мин; Кк - контроль культуры; Кмс – контроль культуры с МС;

использовали в эксперименте, приводила к снижению числа КОЕ B. abortus 19 лишь до 38 ± 4 % после 60 мин ФДВ (I = 5 мВт/см2). В результате анализа контрольных фотосенсибилизатора, в ряде случаев выявлена стимуляция роста клеток.

Наибольшее количество КОЕ = 131 ± 13 % было при облучении в течение 20 мин световыми диодами с I = 1 мВт/см2.

В ходе проведенных экспериментов по инактивации бактерий вакцинного штамма B. abortus 19 ВА методом ФДВ полной инактивации клеток указанного штамма зарегистрировано не было. В связи с тем, что на результат инактивации бактерий влияет комбинация параметров ФДВ, а именно концентрация фотосенсибилизатора, плотность мощности и время воздействия светодиодного излучения, проведено компьютерное моделирования взаимодействия бактериальной взвеси и светодиодного излучения. Экспериментально для каждой бактериальной взвеси B. abortus 19, также как и для микроорганизмов E. coli spp. и P. aeruginosa spp., измеряли отношение:

где KО – количество живых клеток в облучаемой взвеси, Kс – количество клеток, выживших после облучения.

Модель первого типа. Зависимость M от комбинированного параметра облучения (С·Р·Т) искали в виде:

где С – концентрация фотосенсибилизатора, P – средняя мощность облучения, T – длительность облучения, 1, 2, 3, 4 – искомые константы.

После проведения подгонки параметров методом наименьших квадратов, была определена теоретическая зависимость, аппроксимирующая экспериментальные данные (Рисунок 46). Как видно эта зависимость аналогична зависимости полученной при облучении бактерий штаммов P. aeruginosa 27533, E. coli B6, E. coli K12 и E. coli О1 световыми и лазерными диодами на длине волны 0 = 650 нм при = 10нм с плотностью мощности 1, 3 и 5 мВт/см2.

Рисунок 46 – Зависимость относительного количества выживших клеток B. abortus 19 BA от времени облучения световыми диодами: точки – экспериментальные данные, сплошная линия – аппроксимирующая кривая Идентификацию параметров математической модели (18) проводили на основе экспериментальных результатов. В таблице 8 представлены коэффициенты, определяющие нелинейную модель взаимодействия клеток B. abortus 19 BA и светодиодного излучения.

Как следует из результатов компьютерного моделирования при ФДВ на взвесь бактерий B. abortus 19 BA, инактивация более 99 % клеток происходит после 6 мин облучения (I = 1 мВт/см2) в комбинации с 0,005 % МС.

Таблица 8 – Идентификация параметров взаимодействия клеток B. abortus 19 BA и светодиодного излучения (математическая модель) бактерий облучения B. abortus Однако эти данные требуют проведения эксперимента in vitro, т.к. по результатам предварительных экспериментов, представленных на рисунках 43-45 видно, что облучение даже в течение 1 ч не вызывает 100 % инактивации бактерий.





Дальнейшие эксперименты по ФДВ на бактерии B. abortus 19 BA были проведены только при добавлении МС в концентрации 0,005 % и I = 1 мВт/см2.

Светодиодное красное излучение (I = 1 мВт/см2) в комбинации с 0,005 % МС подавляло рост бактерий B. abortus 19 BA при длительности воздействия от 5 до мин. Через 3 ч ФДВ рост клеток B. abortus 19 BA на эритрит агаре полностью отсутствовал, срок наблюдения 10 сут. (Рисунки 47, 48).

Электронная микроскопия инактивированных бактерий B. abortus 19 ВА показала, что размеры клеток незначительно увеличились (Таблица 9), тинкториальные свойства не изменились.

Поскольку сохранение антигенных свойств вакцинного штамма является крайне важным для обеспечения им высокой иммуногенности соответствующей вакцины, на наш взгляд, следовало прояснить - сохранилась ли их активность после ФДВ.

Поэтому на следующем этапе мы исследовали специфическую активность антигенов Рисунок 47 – Изменение числа КОЕ бактерий B. abortus 19 BA (О) после ФДВ (I = 1 мВт/см2; МС = 0,005 %) в течение 5–180 мин; Кк – контроль культуры; Кмс – контроль культуры Рисунок 48 – Изменени числа КОЕ бактерий B. abortus 19 BA после ФДВ:

полностью инактивированных бактерий B. abortus 19 BA в наиболее часто используемой и хорошо зарекомендовавшей себя системе реакций прямой (РА) и непрямой агглютинации (РНГА). В качестве контроля использовали культуру того же вакцинного штамма, не подвергавшуюся облучению.

Таблица 9 – Размеры клеток B. abortus 19 ВА до и после ФДВ Как и предполагалось, было выявлено сохранение антигенной активности клеток B. abortus 19 BA после ФДВ. Так, в опытном и контрольном рядах пробирок РА была оценена на 3 + (до разведения сыворотки 1:160): на дне пробирок наблюдали образование выраженного агглютината с мутной надосадочной жидкостью.

Следовательно, клетки вакцинного штамма B. abortus 19 BA после ФДВ сохраняли соматический А-антиген, выявляемый коммерческой диагностической тестсистемой.

Постановку РНГА с диагностикумом эритроцитарным бруцеллезным иммуноглобулиновым проводили с использованием бактерий B. abortus 19 BA до и после ФДВ в течение 3 ч. Была отмечена положительная реакция (образование «зонтика») как с интактной, так и с инактивированной культурой в разведении 3,7·106 м.к./мл на 4 + (Рисунок 49).

Таким образом, клетки вакцинного штамма B. abortus 19 BA после инактивации методом ФДВ (I = 1 мВт/см2; МС = 0,005 %) в течение 3 ч полностью сохранили комлекс диагностически значимых специфических антигенов.

Рисунок 49 – Результаты РНГА с коммерческим иммуноглобулиновым бруцеллезным диагностикумом: I – интактная взвесь B. abortus 19 BA;

4.2. Характеристика культурально-морфологических, биохимических и серологических свойств бактерий вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ Первоначально было проведено изучение культурально-морфологических, тинкториальных и биохимических свойств бактерий вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ. Культивировали бактерии при температуре 37 оС на Ft – агаре и МПА.

На Ft – агаре клетки указанного штаама формировали круглые, гладкие, блестящие, выпуклые колонии серовато-белого цвета, с ровными краями, размерами до 2 мм в диаметре. На МПА рост отсутствовал, что является характерным признаком бактерий рода Francisella. При микроскопическом исследовании клеток вакцинного штамма F. tularensis 15 были выявлены типичные очень мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии кокковидной формы размерами 0,3 х 0,5 мкм без жгутиков (Рисунок 50). Исследуемые бактерии вакцинного штамма туляремии обладали характерной биохимической активностью: ферментировали глюкозу, мальтозу, маннозу, левулезу; образовывали сероводород; ферментировали пенициллин и не ферментировали фосфатазу, глицерин, цитруллин; не образовывали индол (Таблица 10).

Облучение взвеси клеток вакцинного штамма туляремии с МС в концентрациях 0,0005; 0,005 или 0,05 % проводили с использованием красных светодиодов (0 = ± 10 нм), мощность излучения которых была 0.2; 0,6; 1 мВт, плотность мощности – I = 1, 3, и 5 мВт/см2 соответственно. Для проведения исследований приготавливали взвесь бактерий по отраслевому стандартному образцу мутности (ОСО 42-28-85П) 10 МЕ соответствующего года выпуска (Методические указания …, 2007), эквивалентных 5109 м.к./мл F. tularensis 15. Время ФДВ составляло от 5 до 60 мин.

Как и в предыдущих экспериментах обязательно проводили опытные и контрольные исследования по независимому влиянию на клетки штамма F. tularensis различных концентраций МС и СД излучения. На рисунках 51-53 представлены изменения числа КОЕ бактерий F. tularensis 15 после ФДВ.

Анализ полученных результатов показал, что МС оказывал бактерицидное действие на культуру F. tularensis 15. Снижение количества КОЕ до 9 ± 0,1 % отмечалось при длительности воздействия 60 мин и концентрации МС = 0,05 %.

Красное СД излучение вызывало снижение числа КОЕ до 65 ± 3 % (I = 5мВт/см2, воздействие в течение 60 мин) по сравнению с контрольными значениями. Было Рисунок 50 — Изучение типичных культурально-морфологических свойств штамма F. tularensis 15 НИИЭГ: а – морфология и размеры клеток, б – рост на Ft-агаре;

Таблица10 – Изучение биохимических свойств бактерий вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ до ФДВ Штамм бактерий Рисунок 51 – Изменение числа КОЕ бактерий F. tularensis 15 НИИЭГ (Осд) после ФДВ (1 мВт/см2): экспозиции с МС в концентрациях 0,0005 % (а); 0,005 % (б);

0,05 % (в) в течение 5–60 мин; Кк – контроль культуры; Кмс – контроль культуры с МС; Ксд – контроль облучения световыми диодами Рисунок 52 – Изменение числа КОЕ бактерий F. tularensis 15 НИИЭГ (Осд) после ФДВ (3 мВт/см2): экспозиции с МС в концентрациях 0,0005 % (а); 0,005 % (б);

0,05 % (в) в течение 5–60 мин; Кк – контроль культуры; Кмс – контроль культуры с МС; Ксд – контроль облучения световыми диодами Рисунок 53 – Изменение числа КОЕ бактерий F. tularensis 15 НИИЭГ (Осд) после ФДВ (5 мВт/см2): экспозиции с МС в концентрациях 0,0005 % (а); 0,005 % (б);

0,05 % (в) в течение 5–60 мин; Кк – контроль культуры; Кмс – контроль культуры с МС; Ксд – контроль облучения световыми диодами установлено, что ФДВ более выраженно повлияло на колониеобразующую способность культуры F. tularensis 15.



Pages:     | 1 |   ...   | 16 | 17 || 19 | 20 |   ...   | 31 |
 


Похожие материалы:

« СТЕПАНОВ Николай Витальевич СОСУДИСТЫЕ РАСТЕНИЯ ПРИЕНИСЕЙСКИХ САЯН 03.02.14 - Биологические ресурсы Диссертация на соискание учёной степени доктора биологических наук Красноярск 2014 СОДЕРЖАНИЕ 4 Введение Глава 1. История исследования флоры 14 Глава 2. Физико-географические условия. 28 29 2.1. Геоморфология, орогенез, геология 33 2.2. Гидрография 35 2.3. Климат 39 2.4. Почвы 41 2.5. Растительность Глава 3. Материалы и методы исследований. 72 Глава 4. Анализ флоры сосудистых ...»

«НА ПРАВАХ РУКОПИСИ СИГИДА РОМАН СЕРГЕЕВИЧ ОСОБЕННОСТИ ОРГАНИЗАЦИИ РИТМОСТАЗА У ПОДРОСТКОВ С РАЗЛИЧНОЙ АДАПТАЦИЕЙ К УЧЕБНЫМ НАГРУЗКАМ 03.00.13 – ФИЗИОЛОГИЯ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор В.А. Батурин Ставрополь - 2004 2 Принятые сокращения АД –артериальное давление АМо- амплитуда моды АП - адаптационный потенциал ВПМ- вариационная пульсометрия ДАД –диастолическое артериальное давление ДМ –динамометрия ...»

« РЫЛЬНИКОВ Валентин Андреевич ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПОДХОДЫ К УПРАВЛЕНИЮ ЧИСЛЕННОСТЬЮ СИНАНТРОПНЫХ ВИДОВ ГРЫЗУНОВ (на примере серой крысы Rattus norvegicus Berk.) Специальность 03.00.16 – экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Пермь – 2007 2 Оглавление Введение………………………………………………………………………. 7 Глава 1. Обзор литературы 1.1. Экология серой крысы (пасюк)………………………………………… 25 1.1.1. Характеристика питания серой крысы…….………………………… 25 1.1.2. ...»

« Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и в отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Андрей Юрьевич Миронов доктор медицинских наук Елена Васильевна Алиева Ставрополь — 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ...»

« Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ Специальность 03.01.02 – биофизика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук. Научный руководитель доктор физико-математических наук Мальцев В.П. Новосибирск – 2011 Содержание Введение Глава 1 Обзор литературы 1.1. “Лиганд” и “рецептор”. Типы клеточных рецепторов ...»

« 'Oi.200.7 1 5 5 9 3 МИНАЕВА Любовь Валерьевна ^/-/eMaci^cL^ ЭКСПЕРРТМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РОЛИ ИЗМЕНЕНИЙ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В РЕАЛИЗАЦИИ ПОБОЧНЫХ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ПОВТОРНОГО ВВЕДЕНИЯ ЦРЖЛОФОСФАНА 14.00.20 - токсикология, 03.00.04 - биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук профессор А.И.Карпищенко кандидат медицинских наук С.И.Глушков САНКТ- ПЕТЕРБУРГ 2007 2 ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ...»

« ЛАРИОНОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ РАЗНООБРАЗИЕ СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ НА ГРАДИЕНТЕ КОНТИНЕНТАЛЬНОСТИ КЛИМАТА В ХАКАСИИ 03.00.05 – БОТАНИКА Научный руководитель Ермаков Николай Борисович д.б.н., с.н.с. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск - 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования Цели и задачи исследования Защищаемые положения Научная новизна Практическая значимость Апробация работы и публикации Благодарности ГЛАВА 1. ...»

«Кочерина Наталья Викторовна АЛГОРИТМЫ ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО УЛУЧШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ Специальность 03.00.15 – Генетика Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН В. А. Драгавцев Санкт–Петербург – 2009 2 Оглавление Глава I. Введение…………………………………………………….……….…4 О реальной природе организации сложных полигенных экономически важных признаков растений…….……………………9 Глава II. Постановка задач ...»

« ГАЛКИНА МАРИЯ АНДРЕЕВНА БИОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНВАЗИОННЫХ ВИДОВ РОДА BIDENS L. В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ 03.02.01 – БОТАНИКА ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК Научный руководитель д.б.н. Виноградова Ю.К. Москва – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение ……………………………………………………………………….4 Глава 1. Объекты и методы ………………………………………………….10 Глава 2. История распространения инвазионных видов рода Bidens L. на территории Европы …………………………………… Глава 3. ...»

« Никитенко Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Борок – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 3 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ГЛАВА 2. ФИЗИКО–ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 17 ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 36 ГЛАВА 4. МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО ...»








 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.