WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS


Pages:     | 1 |   ...   | 19 | 20 || 22 | 23 |   ...   | 31 |

Ульянова онега владимировна методология повышения безопасности бактериальных вакцин на модели вакцинных штаммов brucella abortus 19 ba, francisella tularensis 15 нииэг, yersinia

-- [ Страница 21 ] --

Остаточную вирулентность вакцинного штамма В. abortus 19 ВА до и после фотоинактивации определяли также на морских свинках контрольной и опытной групп. Животным обеих групп вводили культуру в дозах 1·10 3; 1·104 или 2· м.к./мл: контрольной группе – интактную двухсуточную агаровую культуру В. abortus 19, а опытной – взвесь клеток после 3 ч инактивации методом ФДВ. В контрольной и опытной группах все морские свинки выжили, срок наблюдения суток. По истечении этого срока проводили эвтаназию, вскрытие животных и оценку распространенности, приживаемости интактной и фотоинактивированной культур В. abortus 19 путем высева на эритрит агар лимфатических узлов (паховых, подчелюстных, заглоточных, парааортальных), печени, селезенки и костного мозга.

Посевы инкубировали в термостате при 37 оС в течение 25 сут., просматривая их каждые 3-4 дня. Рост колоний отмечали в чашках с посевами паховых лимфатических узлов животных контрольной группы, которым вводили 1· м.к./мл культуры. В посевах органов и тканей морских свинок, которым инокулировали 1·104 или 2·109 м.к./мл интактной культуры, рост бактерий B. abortus 19 обнаруживался из всех лимфатических узлов и внутренних органов (Рисунок 71 а, б). В посевах из органов и тканей опытной группы животных рост культуры B. abortus 19 BA на эритрит агаре отсутствовал (Рисунок 72 а, б).

Реактогенность вакцинного штамма B. abortus 19 BA до и после ФДВ определяли на морских свинках из предыдущих опытов по оценке безвредности и остаточной вирулентности. Наблюдали реакцию животных на введение фотоинактивированной (опыт) или интактной (контроль) взвесей клеток B. abortus 19 BA. Общая воспалительная реакция у особей обеих групп отсутствовала:

сохранялись нормальная температура тела 38 ± 0,5 оС; аппетит и масса. Оценку местной воспалительной реакции осуществляли как при жизни животных, так и в Рисунок 71 – Рост культуры В. abortus 19 ВА на эритрит агаре в посевах лимфатических узлов (а) и внутренних органов (б) контрольной группы морских свинок после введения 2·109 м.к./мл интактных бактерий Рисунок 72 – Отсутствие роста культуры В. abortus 19 ВА на эритрит агаре в посевах лимфатических узлов (а) и внутренних органов (б) опытной группы морских свинок после введения 2·109 м.к./мл фотоинактивированных в течение 3 ч бактерий постмортальный период. При пальпации места введения не обнаружено отека, уплотнений лимфатических узлов и мягких тканей. При вскрытии морских свинок наблюдали паховые лимфатические узлы обычных размеров не спаянные с окружающей тканью.

Поскольку после введения морским свинкам клеток вакцинного штамма B. abortus 19 BA, инактивированных методом ФДВ в течение 3 ч у животных отсутствовали специфические поражения, характерные для бруцеллезной инфекции, можно сделать вывод о том, что упомянутая культура оказалась безопасной для лабораторных животных.

5.2. Определение безвредности, остаточной вирулентности и реактогенности вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ до и после инактивации методом фотодинамического воздействия в экспериментах на морских свинках Оценку безвредности вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ проводили также в экспериментах на морских свинках. Контрольной группе животных вводили 5·109 м.к./мл интактных бактерии, а опытной – микроорганизмы после инактивации методом ФДВ в течение 6 ч. За период наблюдения (30 сут) не зарегистрировано погибших животных в контрольной и опытной группах; температура и масса тела морских свинок сохранялись на первоначальном уровне.

Сравнительное изучение морфологических показателей лабораторных животных обеих групп проводили в постмортальный период. Для этого, проведя эвтаназии, морских свинок вскрывали на 7, 21 и 30 сутки после введения бактерий вакцинного штамма F. tularensis 15.

При вскрытии на 7 сутки у отдельных животных контрольной группы были зарегистрированы значительные морфологические изменения, вызванные введением интактной культуры вакцинного штамма F. tularensis 15. Наблюдали: образование инфильтратов до 1,0 см; гнойных очагов около 0,4 см в диаметре и кровоизлияний;

умеренное (в 1,5 раза) увеличение паховых лимфатических узлов, отек мягких тканей бедра и паховой области в месте инокуляции. Отмечали увеличение селезенки, ее умеренное полнокровие, а также образование единичных очень мелких очагов серовато-белого цвета. Печень у морских свинок в контрольной группе была увеличена незначительно, имела сероватый оттенок, выявлялось венозное полнокровие. На фоне серовато-синюшной ткани легких наблюдали миллиарные очаги уплотнения серовато-розового цвета.

морфологические изменения были менее выраженными. В паховых и отдаленных лимфатических узлах наблюдали незначительные воспалительные изменения, которые проявлялись в виде отека мягких тканей и небольших инфильтратов.

Селезенка и печень были без изменений.

На 30 день исследований у некоторых морских свинок контрольной группы на вскрытии были отмечены лишь небольшие рубцовые изменения мягких тканей.

В опытной группе морских свинок не зарегистрировано морфологических изменений подкожно жировой клетчатки, лимфатических узлов и внутренних фотоинактивированной культуры вакцинного штамма F. tularensis 15.

Оценку остаточной вирулентности вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ инактивированной культур на морских свинках из опыта по исследованию безвредности. Для этого постмортально исследовали по 3 морские свинки из опытной и контрольных групп на 7, 21 и 30 сутки. После вскрытия и визуальной оценки макроскопических морфологических изменений, проводили высевы регионарных, контрлатеральных, отдаленных лимфатических узлов, печени, селезенки, легких, сердца и костного мозга на Ft-агар. Чашки инкубировали при 37 оС в течение 7 суток, просматривая ежедневно.





Рост бактерий вакцинного штамма F. tularensis 15 наблюдали в отпечатках печени и селезенки морских свинок контрольной группы, вскрытых на 14 сутки после инокуляции (Рисунок 73 а). У этих же животных в отпечатках легких, крови и костного мозга роста туляремийных микробов не обнаружено (Рисунок 73 а). Как видно на рисунке 73 б рост культуры был зафиксирован в отпечатках паховых и регионарных лимфатических узлов от животных вскрытых даже на 30 сутки.

На чашках с аналогичными посевами органов и тканей животных опытной группы, которым вводили культуру вакцинного штамма F. tularensis инактивированную методом ФДВ в течение 6 ч, рост отсутствовал (Рисунок 74 а, б).

Реактогенность культур вакцинного штамма F. tularensis 15 изучали на морских свинках из опытов по определению безвредности, проводя прижизненные наблюдения.

В контрольной группе животных у 7-ми из 30 особей зарегистрировали повышение температуры тела до 40,1 °С в течение первых семи суток наблюдения; у остальных 23 особей сохранялась нормальная температура, в среднем 38,3 °С. При пальпации места введения определяли уплотнение и увеличение лимфатических узлов, их спаянность с отечными мягкими тканями. Снижения массы тела морских свинок не зарегистрировано.

В опытной группе лабораторных животных средняя температура тела особей не превышала 38,5 °С, что соответствовало температуре тела здоровых животных.

Масса морских свинок не изменялась, при пальпации мягких тканей не обнаружено очагов уплотнения. На основании проведенных исследований можно сделать вывод о том, что инактивированная культура F. tularensis 15 не вызывала местной и общей воспалительных реакций в организме морских свинок.

Рисунок 73 - Рост культуры F. tularensis 15 НИИЭГ на Ft-агаре в посевах внутренних органов (а) и лимфатических узлов (б) контрольной группы морских свинок после Рисунок 74 – Отсутствие роста культуры F. tularensis 15 НИИЭГ на Ft-агаре в посевах внутренних органов (а) и лимфатических узлов (б) опытной группы морских свинок после введения 5·109 м.к./мл фотоинактивированных в течение 6 ч бактерий инактивированные методом ФДВ в течение 6 ч, по отсутствию признаков остаточной вирулентности, реактогенности и безвредности могут считаться безопасными для морских свинок.

5.3. Определение реактогенности вакцинных штаммов B. abortus 19 BA и F. tularensis 15 когерентно-оптическими методами в экспериментах Далее были проведены инструментальные исследования реактогенности вакцинных штаммов B. abortus 19 BA и F. tularensis 15 НИИЭГ, до и после инактивации методом ФДВ. В in vivo экспериментах на морских свинках определяли реактогенность упомянутых штаммов на организменном и тканевом уровнях когерентно-оптическими методами. Для этого проводили оценку микроциркуляции крови церебральных (методом спекл-имиджинга) и брыжеечных (методом спеклмикроскопии) сосудов. Важно подчеркнуть, что в установках для проведения спеклимиджинга и спекл-микроскопии использовали лазер в качестве источника освещения, а не белый свет. Поэтому, так как в данной диссертационной работе источники когерентного излучения были использованы для инактивации бактерий, мы сочли необходимым проведение исследований по выявлению условий, при которых методы спекл-имиджинга (LASCA) и спекл-микроскопии являлись бы полностью неинвазивными.

5.3.1. Разработка научно-методических основ применения биосистем тканевого и организменного уровней для оценки реактогенности В данной диссертационной работе предложен компьютеризированный диагностический комплекс, в который входили двухуровневая биосистема и воздействовавших на лабораторное животное и собственно лабораторного животного (морская свинка), выступавшего в качестве сенсорного звена. В качестве физического датчика выступали лазерные измерительные системы, которые объективно регистрировали количественные изменения, происходящие в биосенсорном звене. Создание данного комплекса было предназначено для оценки реактогенности вакцинных штаммов B. abortus 19 BA и F. tularensis 15 НИИЭГ на тканевом и организменном уровнях.

Общеизвестно (Владимиров, 1999), что лазерное излучение может само оказывать влияние на живые организмы, поэтому лазерный датчик, предназначенный только для регистрации изменений в биосенсорном звене, сам может оказывать возмущающее воздействие на это звено (морскую свинку). В связи с этим, при разработке научно-методических основ лазерных диагностических биосистем, особо актуальным и чрезвычайно важным являлось определение условий минимально неинвазивного уровня воздействия лазерного излучения на боисенсорное звено.

Определение минимально неинвазивного уровня воздействия лазерного излучения на лабораторных животных. Прежде, чем исследовать влияние бактерий вакцинных штаммов B. abortus 19 BA и F. tularensis 15 НИИЭГ на микроциркуляцию крови морских свинок, проводили чрескожное облучение сосудов интактных животных для определения воздействия на них лазерного излучения. Перед экспериментом с поверхности кожи животных удаляли волосяной покров. Для облучения использовали He-Ne лазер ЛГН-207 (=633 нм, Р=3 мВт); одномодовые VCSEL лазеры (=850 нм, с регулируемой мощностью до 1,5 мВт) и полупроводниковые лазеры КЛМ-650, КЛМ-980 (=650 нм, =980 нм, Р=5 мВт).

Мощность излучения в установке по облучению животных регулировали дискретно и определяли числом лазеров, включенных для облучения.

Для изучения параметров микроциркуляции крови в тканях кожи лабораторных животных in vivo использовали оригинальную установку, в состав которой входили лазер, оптические детекторы, фотоприемник и компьютерный анализатор спектра (Рисунок 75 а, б).



Pages:     | 1 |   ...   | 19 | 20 || 22 | 23 |   ...   | 31 |
 


Похожие материалы:

« СТЕПАНОВ Николай Витальевич СОСУДИСТЫЕ РАСТЕНИЯ ПРИЕНИСЕЙСКИХ САЯН 03.02.14 - Биологические ресурсы Диссертация на соискание учёной степени доктора биологических наук Красноярск 2014 СОДЕРЖАНИЕ 4 Введение Глава 1. История исследования флоры 14 Глава 2. Физико-географические условия. 28 29 2.1. Геоморфология, орогенез, геология 33 2.2. Гидрография 35 2.3. Климат 39 2.4. Почвы 41 2.5. Растительность Глава 3. Материалы и методы исследований. 72 Глава 4. Анализ флоры сосудистых ...»

«НА ПРАВАХ РУКОПИСИ СИГИДА РОМАН СЕРГЕЕВИЧ ОСОБЕННОСТИ ОРГАНИЗАЦИИ РИТМОСТАЗА У ПОДРОСТКОВ С РАЗЛИЧНОЙ АДАПТАЦИЕЙ К УЧЕБНЫМ НАГРУЗКАМ 03.00.13 – ФИЗИОЛОГИЯ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор В.А. Батурин Ставрополь - 2004 2 Принятые сокращения АД –артериальное давление АМо- амплитуда моды АП - адаптационный потенциал ВПМ- вариационная пульсометрия ДАД –диастолическое артериальное давление ДМ –динамометрия ...»

« РЫЛЬНИКОВ Валентин Андреевич ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПОДХОДЫ К УПРАВЛЕНИЮ ЧИСЛЕННОСТЬЮ СИНАНТРОПНЫХ ВИДОВ ГРЫЗУНОВ (на примере серой крысы Rattus norvegicus Berk.) Специальность 03.00.16 – экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Пермь – 2007 2 Оглавление Введение………………………………………………………………………. 7 Глава 1. Обзор литературы 1.1. Экология серой крысы (пасюк)………………………………………… 25 1.1.1. Характеристика питания серой крысы…….………………………… 25 1.1.2. ...»

« Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и в отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Андрей Юрьевич Миронов доктор медицинских наук Елена Васильевна Алиева Ставрополь — 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ...»

« Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ Специальность 03.01.02 – биофизика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук. Научный руководитель доктор физико-математических наук Мальцев В.П. Новосибирск – 2011 Содержание Введение Глава 1 Обзор литературы 1.1. “Лиганд” и “рецептор”. Типы клеточных рецепторов ...»

« 'Oi.200.7 1 5 5 9 3 МИНАЕВА Любовь Валерьевна ^/-/eMaci^cL^ ЭКСПЕРРТМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РОЛИ ИЗМЕНЕНИЙ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В РЕАЛИЗАЦИИ ПОБОЧНЫХ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ПОВТОРНОГО ВВЕДЕНИЯ ЦРЖЛОФОСФАНА 14.00.20 - токсикология, 03.00.04 - биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук профессор А.И.Карпищенко кандидат медицинских наук С.И.Глушков САНКТ- ПЕТЕРБУРГ 2007 2 ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ...»

« ЛАРИОНОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ РАЗНООБРАЗИЕ СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ НА ГРАДИЕНТЕ КОНТИНЕНТАЛЬНОСТИ КЛИМАТА В ХАКАСИИ 03.00.05 – БОТАНИКА Научный руководитель Ермаков Николай Борисович д.б.н., с.н.с. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск - 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования Цели и задачи исследования Защищаемые положения Научная новизна Практическая значимость Апробация работы и публикации Благодарности ГЛАВА 1. ...»

«Кочерина Наталья Викторовна АЛГОРИТМЫ ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО УЛУЧШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ Специальность 03.00.15 – Генетика Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН В. А. Драгавцев Санкт–Петербург – 2009 2 Оглавление Глава I. Введение…………………………………………………….……….…4 О реальной природе организации сложных полигенных экономически важных признаков растений…….……………………9 Глава II. Постановка задач ...»

« ГАЛКИНА МАРИЯ АНДРЕЕВНА БИОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНВАЗИОННЫХ ВИДОВ РОДА BIDENS L. В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ 03.02.01 – БОТАНИКА ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК Научный руководитель д.б.н. Виноградова Ю.К. Москва – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение ……………………………………………………………………….4 Глава 1. Объекты и методы ………………………………………………….10 Глава 2. История распространения инвазионных видов рода Bidens L. на территории Европы …………………………………… Глава 3. ...»

« Никитенко Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Борок – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 3 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ГЛАВА 2. ФИЗИКО–ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 17 ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 36 ГЛАВА 4. МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО ...»








 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.