WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS


Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 31 |

Ульянова онега владимировна методология повышения безопасности бактериальных вакцин на модели вакцинных штаммов brucella abortus 19 ba, francisella tularensis 15 нииэг, yersinia

-- [ Страница 9 ] --

ответственных за продукцию следующих антигенов бруцелл L7/L12, SodC, Omp 31, Omp 25 и IalB индуцировали высокий уровень защиты у мышей, при введении вакцин в липосомах. Все исследования проведены пока только на лабораторных животных. Попытки создать живые векторные вакцины пока не увенчались успехом.

профилактики удобно и экономично, но насколько безопасно введение в макроорганизм живых векторных вакцин, неизвестно (Corbel, Feodorova, 2011).

Поиск высокоэффективных и безопасных для животных и человека средств иммунопрофилактики бруцеллеза в последние годы преимущественно направлен на изыскание щадящих способов инактивации микроорганизмов, а также методов выделения структурных компонентов бруцелл, позволяющих сохранять их иммуногенные свойства. Поэтому, выбор оптимальной антигенной основы для создания противобруцеллезных вакцин для животных и человека является актуальной задачей (Winter, Rowe, Duncan, 2002).

Конструирование вакцин нового поколения для профилактики туляремии затруднено, поскольку для F. tularensis к настоящему времени не определены иммунодоминантные антигены и специфические вирулентные детерминанты (Sjostedt, 2003). В настоящее время проводятся работы по поиску новых протективных антигенов, которые могут быть использованы при конструировании субъединичных вакцин (Holm, Tarnvik, Sandstrom, 1980; Surcel et al., 1989; Sjostedt, Sandstrom, Tarnvik, 1990 a, b; Fulop et al., 1995, 2001; Conlan, 2004). Активно изучают защитную роль ЛПС при формировании иммунного ответа (Sandstrom, et al., 1992;

Sjostedt, Sandstrom, Tarnvik, 1992; Elkins, et al., 1993; Fulop et al., 1995., 2001).

Актуальность проблемы профилактики туляремии определяется наличием природных очагов этой инфекции, находящихся во многих странах северного полушария планеты, эпизоотическая активность которых ежегодно подтверждается обнаружением значительного числа положительных на туляремию проб из объектов внешней среды. Исследования направлены на разработку новых эффективных и безопасных вакцин против туляремийной инфекции.

Ежегодно регистрируемые эпизоотии и заболевания людей чумой, наличие природных очагов, выделение атипичных и мультиантибиотикорезистентных штаммов Y. pestis свидетельствуют об эволюции микроорганизма, и дополнительной угрозе возникновения эпидемий, что требует совершенствования специфических средств профилактики чумы (Коротяев, Бабичев, 2002; Williams et al., 1978; Chanteau et al., 1998).

Российскими учеными Ю.А. Книрелем, В.А. Федоровой и А.П. Анисимовым (2011) предложен новый подход создания рекомбинантного штамма чумного микроба. Проведена направленная делеция гена в вакцинном штамме EV, кодирующего ацилтрансферазу – фермент, отвечающий за присоединение одной из жирных кислот к ЛПС. Это привело к снижению токсичности ЛПС, и, как следствие, к исключению ряда побочных эффектов, ослабляющих иммунитет. Введение сконструированного штамма различным видам лабораторных животных, показало его сниженную реактогенность и более высокую безопасность, по сравнению с исходным штаммом. Эти результаты дают возможность рассматривать новый штамм как прототип высокоэффективной, безвредной и безопасной живой чумной вакцины (Feodorova et. al., 2007, 2009; Книрель, Федорова, Анисимов, 2011). Другим биотехнологическим подходом к повышению безопасности вакцин было создание антиидиотипических (АИТ) вакцин, не содержащих материала патогена, что полностью исключает риск реверсии даже аттенуированного бактериального штамма в организме вакцинируемого с полным сохранением способности иммуноглобулиновых «копий» протективных антигенов индуцировать выработку протективного иммунитета. Это было продемонстрировано недавно в работе Девдариани З.Л. и Федоровой В.А. (2006), где отмечалось, что были получены мышиные антиидиотипические антитела к белкам Y. pestis с молекулярной массой 72, 54, 25 и 87 кД, кодируемым плазмидой вирулентности возбудителя чумы (pCad, pLcr). Комплементарность к исходным антигенам была подтверждена с использованием иммунохимического, функционального, иммунологического и иммунобиологического критериев. T. Burrows в 50-х годах прошлого столетия отметил протективные свойства белка LcrV чумного микроба (Burrows et al., 1963).

Весьма перспективным, с точки зрения повышения безопасности проилактических препаратов, является современный метод конструирования субъединичных вакцин.

Так, в Мичиганском университете США, российский ученый В. Мотин, сконструировал рекомбинантный белок LcrV, ставший компонентом субъединичной чумной вакцины (Motin et al., 1994). Введение указанной вакцины мышам обеспечивало высокий уровень активной и пассивной защиты от экспериментальной чумной инфекции (Feodorova, Corbel, 2009; Feodorova, Motin, 2011).

Для создания двухкомпонентной рекомбинантной вакцины, содержащей протективные антигены F1 и LcrV, кодируемый химерным геном, используют два способа. Один из них применяют в США. Сконструирован белок, включающий нуклеотидные последовательности двух исходных генов в одной рамке считывания (F1-V). Оральное или интраназальное введение этой вакцины предохраняло белых мышей от аэрозольного заражения. Однократная подкожная вакцинация защищала от бубонной и легочной чумы в течение года. И, кроме того, у вакцинированных животных отмечали высокий титр антител. Второй способ был предложен в Великобритании. Создана двухкомпонентная субъединичная вакцина, содержащая смесь антигенов (F1+V), обладающая выраженной протективной активностью и аддитивным эффектом действия. Эта вакцина защищала мышей от бубонной и легочной чумы, т.е. оказалась более иммуногенной и безопасной, чем убитая USP вакцина. В ближайшие годы планируется представить эту вакцину к лицензированию в Великобритании. Независимые исследования ученых из Японии и США привели к созданию рекомбинантного штамма чумного микроба Y. pestis KIM 1001. В геном этого вирулентного штамма был введен ген ацилтрансферазы 1pxL.





Вакцинация этим штаммом защищала лабораторных животных от подкожного и интраназального заражения чумой. Существенным недостатком полученного штамма является возможность реверсии в вирулентную форму в результате утраты экспрессии 1pxL (Feodorova, Corbel, 2009).

Эпитопные вакцины – также повышение безопасности вакцин, ввиду отсутствия в препарате живых или убитых цельных клеток патогена. Однако зачастую они характеризуются более слабой иммуногенностью за счет более узкой специфичности протективного иммунного ответа. Были проведенны исследования протективной активности эпитопов рекомбинантного антигена T3SS Y. pestis, таких как YpkA, YopH, YopE, YopK, YopM, YopN, YopD и YscC. Показано, что лишь введение YopD эффективно защищал от чумной инфекции белых мышей при заражении бескапсульным штаммом чумного микроба. Однако введение вирулентного штамма Y. pestis СО92, имеющего капсулу F1, после иммунизации защиты не вызывало (Andrews, 1999; Leary et al., 1999; Goodin et al., 2005).

На основе гетерологичных авирулентных для человека бактерий Salmonella spp., Lactococcus spp., аденовирусов, вирусов стоматита или оспы енота, создаются живые рекомбинантные вакцины, аналогичные субъединичным. В них клонируют гены одного или двух протективных антигенов чумного микроба F1 (Caf1) либо LcrV.

Такая рекомбинатная вакцина впервые была создана в России в 1994 г.

сотрудниками ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии (Оболенск) – Гремяковой с соавт. (Гремякова, 1994;). Она стимулировала не только продукцию специфических антител, как субъединичные вакцины, но и Т-клеточный иммунитет (Гремякова и др., 1996, 1997; Гремякова, 2004; Anisimov et al., 2004; Feodorova, Corbel, 2009).

В последние 20 лет активно развивается разработка и конструирование противочумных вакцин третьего поколения — рекомбинантных и ДНК-вакцин, основанных на технологии рекомбинантных ДНК. Это новое поколение вакцин, которые лишены многих недостатков традиционных профилактических препаратов.

Они должны быть более безопасными, в результате проведения направленной делеции детерминант вирулентности, а значит невозможности её реверсии. При этом рекомбинантные и ДНК-вакцины должны индуцировать выраженный специфический иммунный ответ на протективные антигены за счет сохраненной способности к размножению живого рекомбинантного микроорганизма (ограниченное время) на месте введения (Книрель с соавт., 2011).

В настоящее время, одним из ряда предложенных перспективных кандидатов в рекомбинантные вакцины, является V антиген (антиген «вирулентности») чумного микроба. Впервые его обнаружили английские ученые Берроуз Т. и Бекон Дж. в середине 50-х гг прошлого столетия (Burrows, Bacon, 1963). V антиген обладал выраженными протективными свойствами, и это было подтверждено в 1994 г. Motin V.L. (1994). Он впервые показал, что сконструированный им рекомбинантный LcrV обеспечивал высокий уровень активной и пассивной защиты мышей от чумы (Feodorova, Corbel, 2009). V антиген входит в состав двухкомпонентных субъединичных вакцин, которые разрабатывают западные ученые (Burrows, Bacon, 1963; Книрель с соавт., 2011). Группой английских ученых Titball R. et. al.

предложена вакцина, содержащая LcrV в эквимолярной смеси с фракцией первой (F1), являющейся вторым рекомбинантным компонентом (Titball, Williamson, 2001;

2004). Как отмечают авторы, каждый из этих антигенов обладает выраженной протективной активностью, и в комбинации создают аддитивный эффект, защищая в эксперименте мышей от бубонной, и лёгочной чумы. В Великобритании указанная вакцина весьма успешно прошла первые две фазы клинических испытаний. Она оказалась более безопасной и иммуногенной, чем убитая USP вакцина. Возможно, она будет лицензирована как препарат для иммунизации людей. Разработаны две формы вакцины: растворимая и деградируемая в привитом организме. Вторая форма помещена в полиэфирные микросферы, что позволило повысить в 1.7–2.5 раза протективную активность комбинированной вакцины (Книрель с соавт., 2011;

Titball, Williamson, 2001; 2004;

двухкомпонентная рекомбинантная вакцина содержит «фьюжен» белок F1-LcrV (то есть те же антигены), кодируемый химерным геном, который включает нуклеотидные последовательности двух исходных генов в одной открытой рамке считывания. Как отмечают авторы, однократное подкожное введение этой вакцины, начиная с 14-го дня после инъекции, защищало в течение года мышей от экспериментальной бубонной и лёгочной чумы, а при интраназальной или оральной вакцинации – даже от аэрозольного заражения. У вакцинированных животных иммунитет коррелировал с наличием в сыворотке крови высоких титров специфических антител классов IgA к F1 и IgG к LcrV (Книрель с соавт., 2011;

Titball,Williamson, 2004; Feodorova, Corbel, 2009).

Еще одним, новым направлением в разработке противочумных рекомбинантных вакцин является создание, так называемых «съедобных» вакцин, иными словами, трансгенных растений (томаты, картофель и т.д.), в которых происходит наработка протективных антигенов. Такие вакцины должны быть весьма удобны, так как принимаются орально (Alvarez et al., 2006; Arlen et al., 2008; Del. Prete et al., 2009).

Для конструирования субъединичных рекомбинантных вакцин в качестве векторов предложены гетерологичные и авирулентные для человека следующие микроорганизмы: вирусы стоматита или оспы енота, аденовирусы, Salmonella spp., Lactococcus spp., в которых клонируют гены одного или двух (F1 (Caf1) и/или LcrV) протективных антигенов Y. pestis. Перечисленные микроорганизмы не только индуцируют продукцию специфических антител, но и в отличие от субъединичных вакцин, стимулируют также Т-клеточный иммунитет. Научным коллективом – Гремяковой Т., Степаншиной В., Коробовой О. и Анисимовым А. (ГНЦ прикладной микробиологии, г. Оболенск) в 1991 г. был создан один из кандидатов в рекомбинантную чумную вакцину (Гремякова, 1991; 1994; Anisimov et al., 2004;



Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 31 |
 


Похожие материалы:

« СТЕПАНОВ Николай Витальевич СОСУДИСТЫЕ РАСТЕНИЯ ПРИЕНИСЕЙСКИХ САЯН 03.02.14 - Биологические ресурсы Диссертация на соискание учёной степени доктора биологических наук Красноярск 2014 СОДЕРЖАНИЕ 4 Введение Глава 1. История исследования флоры 14 Глава 2. Физико-географические условия. 28 29 2.1. Геоморфология, орогенез, геология 33 2.2. Гидрография 35 2.3. Климат 39 2.4. Почвы 41 2.5. Растительность Глава 3. Материалы и методы исследований. 72 Глава 4. Анализ флоры сосудистых ...»

«НА ПРАВАХ РУКОПИСИ СИГИДА РОМАН СЕРГЕЕВИЧ ОСОБЕННОСТИ ОРГАНИЗАЦИИ РИТМОСТАЗА У ПОДРОСТКОВ С РАЗЛИЧНОЙ АДАПТАЦИЕЙ К УЧЕБНЫМ НАГРУЗКАМ 03.00.13 – ФИЗИОЛОГИЯ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор В.А. Батурин Ставрополь - 2004 2 Принятые сокращения АД –артериальное давление АМо- амплитуда моды АП - адаптационный потенциал ВПМ- вариационная пульсометрия ДАД –диастолическое артериальное давление ДМ –динамометрия ...»

« РЫЛЬНИКОВ Валентин Андреевич ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПОДХОДЫ К УПРАВЛЕНИЮ ЧИСЛЕННОСТЬЮ СИНАНТРОПНЫХ ВИДОВ ГРЫЗУНОВ (на примере серой крысы Rattus norvegicus Berk.) Специальность 03.00.16 – экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Пермь – 2007 2 Оглавление Введение………………………………………………………………………. 7 Глава 1. Обзор литературы 1.1. Экология серой крысы (пасюк)………………………………………… 25 1.1.1. Характеристика питания серой крысы…….………………………… 25 1.1.2. ...»

« Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и в отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Андрей Юрьевич Миронов доктор медицинских наук Елена Васильевна Алиева Ставрополь — 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ...»

« Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ Специальность 03.01.02 – биофизика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук. Научный руководитель доктор физико-математических наук Мальцев В.П. Новосибирск – 2011 Содержание Введение Глава 1 Обзор литературы 1.1. “Лиганд” и “рецептор”. Типы клеточных рецепторов ...»

« 'Oi.200.7 1 5 5 9 3 МИНАЕВА Любовь Валерьевна ^/-/eMaci^cL^ ЭКСПЕРРТМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РОЛИ ИЗМЕНЕНИЙ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В РЕАЛИЗАЦИИ ПОБОЧНЫХ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ПОВТОРНОГО ВВЕДЕНИЯ ЦРЖЛОФОСФАНА 14.00.20 - токсикология, 03.00.04 - биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук профессор А.И.Карпищенко кандидат медицинских наук С.И.Глушков САНКТ- ПЕТЕРБУРГ 2007 2 ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ...»

« ЛАРИОНОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ РАЗНООБРАЗИЕ СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ НА ГРАДИЕНТЕ КОНТИНЕНТАЛЬНОСТИ КЛИМАТА В ХАКАСИИ 03.00.05 – БОТАНИКА Научный руководитель Ермаков Николай Борисович д.б.н., с.н.с. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск - 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования Цели и задачи исследования Защищаемые положения Научная новизна Практическая значимость Апробация работы и публикации Благодарности ГЛАВА 1. ...»

«Кочерина Наталья Викторовна АЛГОРИТМЫ ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО УЛУЧШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ Специальность 03.00.15 – Генетика Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН В. А. Драгавцев Санкт–Петербург – 2009 2 Оглавление Глава I. Введение…………………………………………………….……….…4 О реальной природе организации сложных полигенных экономически важных признаков растений…….……………………9 Глава II. Постановка задач ...»

« ГАЛКИНА МАРИЯ АНДРЕЕВНА БИОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНВАЗИОННЫХ ВИДОВ РОДА BIDENS L. В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ 03.02.01 – БОТАНИКА ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК Научный руководитель д.б.н. Виноградова Ю.К. Москва – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение ……………………………………………………………………….4 Глава 1. Объекты и методы ………………………………………………….10 Глава 2. История распространения инвазионных видов рода Bidens L. на территории Европы …………………………………… Глава 3. ...»

« Никитенко Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Борок – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 3 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ГЛАВА 2. ФИЗИКО–ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 17 ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 36 ГЛАВА 4. МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО ...»








 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.